RNA直接法提取具體操作過(guò)程

來(lái)源：上海邦景實(shí)業(yè)有限公司 2024年09月09日 11:45

1）加入1ml Trizol試劑，混勻，冰上孵育10min。

2）4℃，12000rpm離心10min，小心轉(zhuǎn)移上清液到不含顆粒的新EP管中。

3）加入200ul氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫孵育5min。

4）4℃，12000rpm離心15min。混合液分三層，包括最下面的C6H5OH - 氯仿有機(jī)相，中間相和上層水相。小心轉(zhuǎn)移上層水相到新的EP管（大約60％體積的Trizol），不要吸取中間相，可留下少量上層液體！（Note：質(zhì)量比數(shù)量更重要！）

5）加入等體積的異丙醇，輕輕地顛倒混勻約10次，室溫放置10min。

6）4℃，12000rpm離心10min。棄上清，1ml 75％乙醇洗滌RNA沉淀兩次。

7）4℃，12000rpm離心5min，棄上清，室溫下風(fēng)干5-10min（不要太干，過(guò)度干燥會(huì)導(dǎo)致RNA難溶解！）。將RNA溶于15μl-50μlDEPC水中。

8）立即進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，或先-80℃長(zhǎng)期保存。

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