原代細胞培養過程中可能存在的問題有哪些？

細胞培養是生物學和醫學研究常用的手段之一，可分為原代培養和傳代培養兩種。原代培養是直接從生物體獲取組織或器官的一部分進行培養，也稱初代培養。嚴格地說即從體內取出組織接種培養到第一次傳代階段，但實際上，通常把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。一般持續1-4周。此期細胞呈活躍的移動，可見細胞分裂，但不旺盛。 那么原代細胞培養過程中可能存在的問題有哪些？一起來學習一下吧！

污染：轉移主要組織進行培養時需要注意避免污染。
pH值變化：這可能是由于培養基中的鹽分不正確，細菌或真菌污染，碳酸氫鹽緩沖液不足，二氧化碳張力不正確等引起的。
粘附性不足（細胞不貼壁）：培養基中不含附著因子（attachment factors）或附著因子不足，培養皿或培養基污染，細胞被yi蛋白酶過度消化等。
生長緩慢：原因包括培養基的pH值變化，必需的促進生長的成分/因子耗盡，低污染，試劑儲藏不當等。
細胞死亡：溫度波動，二氧化碳含量過低，在融化和/或冷凍保存過程中細胞受損，有毒代謝產物濃度增加，培養基中的滲透壓失衡導致細胞存活率降低。
沉淀（pH不變）：由于使用了冷凍培養基，在pH不變的培養基中可能會出現沉淀，殘留的磷酸鹽殘留在用洗滌劑洗滌時可能會沉淀出粉末狀的培養基成分。
細胞結塊（細胞不貼壁且結塊）：懸浮細胞可能由于鈣、鎂離子的存在（貫流時應使用不含鈣、鎂離子的D-Hank’s緩沖液（D-HBSS），而不能選擇含有鈣、鎂離子的HBSS或可能含有鈣、鎂離子的PBS緩沖液）或細胞裂解及DNA釋放（過度用蛋白水解酶消化）而結塊。
誘導變異性：多種試劑和培養基會誘導原代細胞的數據產生變異，研究者的處理手法也可能導致原代細胞的數據產生變異。
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