外泌體純化方法有哪些以及其優(yōu)缺點

外泌體研究自過去二十年以來一直是焦點領(lǐng)域。人體內(nèi)多種細胞在正常以及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體，如間充質(zhì)干細胞、內(nèi)皮細胞、腫瘤細胞、骨髓細胞、免疫細胞等。外泌體與干細胞有著類似的功能，在組織工程與再生醫(yī)學方面的臨床前期研究，尤其是干細胞外泌體。那么一起來學習一下外泌體純化方法有哪些以及其優(yōu)缺點吧！

1. 超速離心法是常用的外泌體純化手段，也是普遍認可的一種方式，采用低速離心、高速離心交替進行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。

優(yōu)點：無需特殊試劑，操作簡便，適合大批量樣本。缺點：耗時耗力，純度相對較低，回收率不穩(wěn)定，重復(fù)離心會一定程度損傷外泌體，設(shè)備要求高。

2. 抗體親和（磁珠）法利用包被單克隆抗體的磁珠結(jié)合外泌體，外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。

優(yōu)點：純度較高，特異性和重復(fù)性好、操作簡便、無設(shè)備限制。缺點：效率和回收率較低，僅能捕獲表達特定抗原的目標外泌體，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，囊泡完整性影響較大。

3. 微流控指的是使用微管道（尺寸為數(shù)微米到數(shù)百微米）處理或操縱微小流體（體積為納升到阿升）的系統(tǒng)所涉及的科學和技術(shù)。這種方法具有分離生物顆粒速度快，純度高，節(jié)省樣本，集成度高等優(yōu)點。因此，雖然微流控技術(shù)在外泌體分離方面的應(yīng)用仍處于起步階段，卻已經(jīng)成為了當前研究的熱點。目前，近些年，基于微流控的外泌體分離技術(shù)也在不斷出現(xiàn)。

4. 尺寸排阻色譜(SEC)是基于尺寸而非分子量分離大分子，尺寸排阻色譜可以精確地分離大分子和小分子。SEC主要用于分離血液和尿液中的外泌體，不過，這種外泌體提取方法需要很長時間，并且不適合處理大量樣品。

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