免疫共沉淀的實驗流程是怎樣的呢？

Co-IP全稱Co-Immunoprecipitation，中文學名免疫共沉淀，是一種以抗體和抗原識別專一性為基礎，用于研究蛋白質之間相互作用的經典方法。

通俗點來說，假設我們需要研究樣品中A蛋白和B蛋白之間是否存在一些相互作用，首先我們通過合適的方法處理樣本，將蛋白提取出來（同時不能破壞蛋白之間的相互作用），然后用預先結合了瓊脂糖珠或者磁珠的A蛋白抗體捕獲樣本中的A蛋白，那么與A蛋白結合的B蛋白也能一起沉淀下來。再將蛋白從珠子上裂解下來，對B蛋白進行檢測，能檢測到，說明B蛋白在之前的沉淀過程中隨著A蛋白一起被拉下來了，進而證明二者之間存在相互關系。那么免疫共沉淀的實驗流程是怎樣的呢？一起來學習一下吧！

實驗流程

樣本制備：細胞樣本，收獲細胞，加入適量細胞裂解緩沖液和蛋白酶抑制劑，冰上裂解，超聲破碎，離心取上清。組織樣本，剪碎組織，按組織量加入裂解液和蛋白酶抑制劑，用勻漿液勻漿，直至充分裂解，留心取上清。、
細胞裂解物預清除（選做）：向制備好的裂解物中分別加入一定量的protein A和protein G，4°C旋轉孵育后，離心取上清。 (目的是去除樣本中能和瓊脂糖珠非特異性吸附的雜質，使得后續結果更好)
加入A蛋白的IP抗體：按照抗體說明書的使用比例，添加一定量的A抗體 (能適用于IP實驗)，4°C輕柔混合過夜。
免疫復合物沉檢：加入一定量的Protein A和Protein G，4C溫和地混1- 3小時或過夜，離心保留沉淀，并清洗沉淀3次。(注意:清洗去上清的時候需要避免吸走填料)
洗稅與檢測蛋自：根據樣本的性質和下游檢測手段，選擇合適的洗脫緩沖液，使用洗脫緩沖液將互作蛋白復合物與珠子分離。接著進行下游檢測實驗。
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