支原體檢測方法有哪些？

我們在進行細胞培養(yǎng)實驗過程中易受到較多因素影響，導致支原體污染，對此就要對其進行支原體檢測，排除被污染的可能，就需要借助相關的檢測技術進行支原體檢測，那么支原體檢測方法有哪些？常用的是直接培養(yǎng)法、DNA熒光染色法，酶聯(lián)免疫吸附試驗，PCR檢測法等方法進行檢測。

1. 直接培養(yǎng)法。

直接培養(yǎng)法是檢測支原體的標準方法。是把樣品接種到支原體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，并通過觀察液體培養(yǎng)基的顏色變化或是固體培養(yǎng)基上是否生長支原體菌落進行判斷，但培養(yǎng)法所需培養(yǎng)時間較長，要3～4周左右的時間，其次用培養(yǎng)法不能在同一培養(yǎng)基中檢測出所有的支原體類型，該方法常用于對種毒或疫苗成品的支原體檢測。

2. DNA熒光染色法。

DNA熒光染色法，是把要檢測的樣品接種在指示細胞中進行培養(yǎng)，然后用特異性熒光染料進行染色，再用熒光顯微鏡進行觀察，通過附著在細胞表面的支原體DNA的著色情況判斷該樣品是否被支原體污染。該方法用時短，可進行多個樣品檢測，還能檢測出使用直接培養(yǎng)法難以檢測出的支原體類型。根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)DNA熒光染色法比直接培養(yǎng)法更為敏感、方便，耗時短、準確穩(wěn)定。

3. 酶聯(lián)免疫吸附試驗。

酶聯(lián)免疫吸附試驗即ELISA檢測法，對診斷支原體是較方便和準確的方法之一，常見的ELISA檢測法有間接法和抗原競爭法等，檢測支原體都有較好的特異性及敏感性，并且可以一次性進行多樣品檢測，并且成為檢測支原體的常規(guī)方法之一，一般是通過比色法得出相應的結(jié)果進一步來判定是否有支原體污染的情況。

4. 聚合酶鏈式反應（PCR）檢測法。

PCR方法是一種DNA復制的體外擴增方法，由于支原體生長緩慢對營養(yǎng)環(huán)境要求較高，對支原體直接培養(yǎng)法檢測還有一定局限性，而PCR檢測法相對于直接培養(yǎng)法更為快速、敏感。其中的巢式PCR檢測法是在普通PCR檢測方法上進行優(yōu)化改進的，通過巢式PCR引物擴增后存在的目的片段情況進行合理判斷，并可以對支原體類型進行準確的分析及判斷，進一步對污染源進行判斷。

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