細胞轉染實驗中的注意事項有哪些？

細胞轉染實驗是分子生物學和遺傳學研究中常用的實驗方法之一，用于將外源基因導入真核細胞，以便進行基因表達和功能研究。然而在進行細胞轉染實驗時，需要注意一些事項以確保實驗的準確性和可靠性。接下來就讓我們一起來了解一下在細胞轉染實驗中的注意事項有哪些吧！
一、細胞準備

a.細胞狀態。使用形態正常，活率在90%以上的健康細胞，確保細胞沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的細胞，需要在轉染前傳代3-4次。

b.細胞密度。建議在轉染前24 h接種細胞，貼壁細胞轉染時的細胞密度一般在70%-90%。

c.細胞培養基。細胞培養基中可以添加血清，血清有助于維持轉染后的細胞狀態，但最好不要在培養基中添加抗生素，對于一些敏感細胞，抗生素的存在會引起細胞毒性。

二、轉染試劑的稀釋

a.稀釋液的選擇。建議使用減血清培養基稀釋，血清的存在會影響轉染復合物的形成。

b.轉染試劑的量。需要進行優化，可以固定核酸的量，設置轉染試劑的梯度，建議轉染試劑和DNA的比例在1:1~1:5。

c.稀釋時動作要輕柔，避免劇烈吹打和渦旋。

三、核酸的稀釋

a.核酸的質量。對于質粒DNA，需要使用高純度、無菌、無內毒素的高質量DNA（建議用無內毒素質粒DNA提取試劑盒抽提質粒），對于siRNA，同樣需要保證高純度。

b.核酸的量。可以建立梯度摸索最佳投入量。

c.稀釋時動作要輕柔，避免劇烈吹打和渦旋。

四、轉染復合物的制備

a.加樣順序。Lipomaster系列轉染試劑的加樣順序為稀釋后的核酸加入到稀釋后的轉染試劑中。

b.轉染復合物的孵育時間按照說明書設置。

五、轉染復合物滴加入細胞中

a.轉染復合物滴加時需要逐滴加入，并及時充分混勻，避免培養基局部轉染試劑濃度過高。

b.轉染后6-8h可更換新鮮培養基。對于一些敏感細胞，換液可以降低細胞毒性。

六、觀察分析轉染結果

a.選擇合適的分析方法。若轉染的質粒表達熒光蛋白可以使用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀分析轉染效率。此外，可以運用qPCR檢測mRNA或WB檢測目的蛋白表達。

b.合適的檢測時間。不同的蛋白達到最高表達水平的時間有所差異，需要根據實際情況調整檢測時間。

把控住這些轉染流程中的小細節，你也可以輕松拿捏細胞轉染實驗哦！如果你有更多關于細胞轉染實驗中的注意事項的問題，請給百奧創新留言哦~