處理RT-qPCR實驗樣本的注意事項有哪些？

RT-qPCR是將RNA的反轉錄和cDNA的聚合酶鏈式擴增結合起來，并對起始模板進行定量分析的技術。目前RT-qPCR應用領域廣泛，在科研端可用于基因表達量分析、病原體檢測、RNA干擾驗證，同時也是分子體外診斷的行業金標準，例如在臨床疾病診斷、動物檢驗檢疫、食品安全和科學研究等應用場景均有涉及，肝炎、艾滋病、流感、登革熱、感染性腹瀉等的檢測、診斷和治療上發揮著重要作用。那么在實驗過程中，我們如何正確處理RT-qPCR實驗樣本以提取到高質量的RNA是實驗成功的關鍵，處理RT-qPCR實驗樣本的注意事項有哪些？讓我們跟著小編一起來學習一下吧！

一、避免外源RNase影響

外源RNase是導致RNA降解的主要因素。采集和實驗環境要盡可能整潔，使用的耗材需要用DEPC處理或購買無酶耗材；同時實驗人員操作迅速熟練，使降解時間縮短。

二、避免內源RNase影響

某些富含RNA內源酶的部位 (如脾臟、胸腺) 本身就容易降解，應該在液氮條件下將組織碾碎，且勻漿時使用更多裂解液。

三、根據提取量分裝樣本

取樣前先明確一次提取的組織量，取樣后按照一次提取的量分管保存，避免二次分管和并管造成的污染和降解。

四、選擇高豐度組織部位

不同組織部位的RNA含量不同，實驗中盡量選用高豐度的組織部位，如動物樣本的肝臟、心臟的RNA含量可達2-4 μg/mg，植物樣本中的葉片、根莖為0.2-0.3 μg/mg。

以上就是處理RT-qPCR實驗樣本的注意事項介紹，如果您有更多關于RT-qPCR實驗的問題，請與百奧創新客服聯系！