用Trizol法提取RNA的實驗步驟

RNA是目前發現細胞內生物功能豐富多樣的生物大分子，同時是DNA與蛋白質信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時代的重要手段。今天我們一起來了解一下用Trizol法提取RNA的實驗步驟。
以提取組織細胞為例：

1.提取細胞RNA時，先離心沉淀細胞，每5~10⁶個細胞加1ml Trizol后，反復用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細胞；

2. 將上述組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP管中，在室溫15~30℃下放置5分鐘；

3. 在上述EP管中，按照每1ml Trizol后加0.2ml氯fang的量加入氯fang，蓋上EP管蓋子，在手中用力震蕩15秒，在室溫下（15~30℃）放置2~3分鐘后，12000g（2~8℃）離心15分鐘；

4.去上層水相置于新EP管中，按照每1ml Trizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15~30℃）放置10分鐘后，12000g（2~8℃）離心10分鐘；

5.棄上清，按照每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇進行洗滌，渦旋混合，7500g（2~8℃）離心5分鐘，棄上清；

6.讓沉淀的RNA在室溫在自然干燥；

7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。

8.RNA檢測

(1) RNA的電泳圖譜，電泳的目的是在于檢測28S、18S、5S條帶的完整性和他們的比值，一般的，如果28S和18S條帶明亮、清晰、條帶銳利，并且28S的亮度在18S條帶的兩倍以上，我們認為RNA的質量是好的。

(2) 測定樣品在260nm和280nm的吸光值按1OD=40μg/ml RNA計算RNA的產量，一般的OD260/OD280在1.8-2.0范圍，我們認為RNA的質量是好的，如果R<1.8，說明溶液中蛋白或者時其他有機物的污染比較明顯，如果R>2.2，說明RNA已經水解成單核酸了。

以上就是用Trizol法提取RNA的實驗步驟的方法，更多有關于核酸提取的問題請咨詢百奧創新客服！