大鼠源細胞常見的污染源追蹤及解決

      細胞污染一般可分為微生物污染和真核生物污染。其中微生物污染包括真菌和酵母、細菌、支原體等。而真核生物一般是細胞系間的交叉污染。 細胞常見的污染情況總結如下：

1、細菌污染

細菌是一種原核細胞微生物，其大小以微米(μm)計。常見的污染細菌有革蘭氏陰性菌和大腸桿菌、假單胞菌等，革蘭氏陰性菌中白色葡萄球菌等比較常見。

一旦發生細菌污染較易發現，多數情況下培養液短期內顏色變黃，表明有大量酸性物質產生，出現明顯混濁現象；有時靜置的培養液液體初看不混濁，但稍加振蕩，就有很多混濁物漂起。倒置顯微鏡下觀察，可見培養液中有大量圓球狀顆粒漂浮。必要時可取少量培養液涂片染色檢查以證實細菌種類；有的培養液改變不明顯而又疑有污染，可取出少量培養液用普通肉湯接種或用未加雙抗藥物的培養液接種，也可取10ml細胞懸液以100rpm離心5min，沉淀中加入無抗生素的培養液2ml，置于37℃培養，24h可得結果。污染后細胞發生病理改變，胞內顆粒增多、增粗，最后變圓脫落死亡，造成試驗失敗和細胞株(系)丟失。

看到這種，別猶豫了你的細胞被污染了，那么怎么辦呢，基本原則立馬扔掉，別擴大污染，如果你的細胞真的十分寶貴，先用帶有雙抗的PBS反復沖洗幾遍，然后再培養液中加入硫酸慶大霉su、新霉su（50ug/ml）等，培養3天后換成帶有雙抗的培養液培養。

2、真菌污染

是細胞培養過程中最常見的一種，尤其在梅雨季節進行細胞培養更易污染。污染培養細胞的多為煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多數在培養液中形成白色或淺黃色漂浮物。一般肉眼可見，較易被發現，短期內培養液多不混濁，倒置顯微鏡下可見于細胞之間縱橫交錯穿行的絲狀、管狀、及樹枝狀菌絲，并懸浮飄蕩在培養液中。很多菌絲在高倍鏡可見到有鏈狀排列的菌珠；念珠菌或酵母菌形態呈卵形，散在細胞周邊和細胞之間生長。鏡下看時，要將培養瓶用酒精棉球擦干凈，以防止與瓶外尤其瓶底外面生長的菌絲相混淆。真菌污染后，細胞生長變慢，但最后由于營養耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。

真菌污染真的不建議處理，因為孢子容易飄散，可能這瓶沒9過來，又擴大了污染，建議預防為主，在培養箱的水中加入硫酸銅，就是藍色的那種東西。哎，如果你非救不可，可以采用兩性霉su B（0.25-2.5），三天后換液加入含PS的培養液。

3、支原體污染

支原體是一種大小介于細菌和病毒之間(最小直徑0．2um)并獨立生活的微生物。約有1%可通過濾菌器。支原體無細胞壁形態呈高度多形性。可為圓形、絲狀或梨形。

支原體形態多變，在光境下不易看清內部結構。電鏡下觀察支原體膜為三層結構。其中央有電干密度大的密集顆粒群或絲狀的中心束。支原體多吸附或散在于細胞表面和細胞之間。橫斷面與細胞微絨毛相似，但微絨毛電子密度比支原體小，且中央無顆粒群或中央束。

支原體污染細胞后，培養液可不發生混濁。多數情況下細胞病理變化輕微或不顯著，細微變化也可由于傳代、換液而緩解，因此易被忽視。但個別嚴重者，可致細胞增殖緩慢，甚至從培養器皿脫落。

如果懷疑細胞被支原體污染可使用支原體檢測試劑盒進行檢測，如果確定是支原體污染可以選擇支原體去除試劑進行處理。

4、霉菌污染

　　同真菌感染一致，因為培養液是清亮的，所以霉菌污染早期難以發現，等發現時往往已經為時過晚了。培養液中慢慢地出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，如同風中柳絮，一般不仔細看發覺不出來。細胞仍可生長，但時間一長，細胞的狀態就變差，不再增長。

　　處理方法：建議果斷舍棄該污染細胞，將環境*消毒，因為霉菌的頑固可能會導致下幾批細胞都會污染，所以，采用酒精*底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新潔爾滅擦洗一遍，把水盤里加上飽和量的硫酸銅。千萬不可大意!

5、黑膠蟲污染

　　開始污染時對細胞無影響，當數量達到一定程度時就會對細胞產生影響。400倍顯微鏡下可見點狀或片狀游動小體，培養液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養液顏色、透明度無明顯變化，對細胞生長狀態不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。

　　處理方法：可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率，盡早處理細胞，越快越好。如果實在來不及了，推薦使用——黑膠蟲清除培養基