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    Serochem PEI轉染試劑在CHO懸浮細胞上的轉染步驟

    來源:北京百奧創新科技有限公司   2023年08月07日 15:35  

    Serochem PEI轉染試劑在CHO懸浮細胞上的轉染步驟如下:

    一、轉染前

    傳代和擴增細胞以獲得具有大于95%的活力和介于(1.5至2.0)x 106之間的活細胞密度的培養物.

    二、轉染

    1.在轉染前,確保生存能力大于95%,活細胞密度為(1.5至2.0)x 10 6細胞/mL。

    2.將活細胞密度稀釋至1.05 x 10 6每毫升細胞數。

    3.轉化pDNA和PEI引物™ 1 mg/mL試劑容器多次以充分混合。

    4.將每mL培養物轉移1μg pDNA至一個干凈的小瓶中轉染。用新鮮培養基(5%最終培養體積)稀釋至20μg/mL。

    5.將5μL PEI Prime轉移到一個干凈的小瓶中™ 每毫升1毫克/毫待轉染的培養物。使用培養基稀釋至75μg/mL(5%最終培養物

    體積)。

    6.將稀釋的pDNA和PEI Prime™混合在一起. 反轉幾次,然后允許在室溫下加蓋休息10分鐘。輕輕翻轉,使用前立即關閉容器

    一次。

    7.使用10mL pDNA/PEI混合物用于每90mL待培養的培養物轉染。一邊攪拌一邊逐漸將混合物加入培養基中。

    8.按照典型條件培養細胞。

    三、轉染后

    如果使用飼料、加強劑、補充劑或增強劑,在轉染后6小時可以添加

    根據細胞培養基的不同,可能需要添加鈉丁酸鹽添加到培養基中以獲得CHO懸浮液中的基因表達。如有必要,確定,制備5個

    轉染后的亞培養物,并添加丁酸鈉至0、2.5、5、7.5或10mM的最終濃度基于最終產率的適當濃度。如果使用GFP對照,轉染效率應超過70%。48小時后觀察。對于優化的程序,超過80%的效率是合理的。監測表達水平并在

    察到穩定滴度后收獲。對于典型的過程,在轉染后5至7天分泌的蛋白質將最高。其他工藝,如使用低溫和/或使用批進料以獲得

    最大產量,將改變峰值收獲窗口。

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