流式細(xì)胞儀血小板分析

流式細(xì)胞儀血小板分析應(yīng)用范圍

通過分析信號(hào)傳遞、細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)、顆粒釋放、糖蛋白構(gòu)形、膜磷脂、與抗凝因子的結(jié)合和微粒形成，分析血小板活化，血小板對(duì)刺激物的反應(yīng)性
通過分析受激后表面結(jié)合蛋白觸發(fā)凝血鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和表面糖蛋白缺陷檢測，分析血小板止血功能的獲得性和遺傳性缺陷
結(jié)合血小板大小，檢測血小板RNA含量，分析血小板成熟度，計(jì)數(shù)網(wǎng)織血小板
發(fā)現(xiàn)血小板抗體，做定性和定量分析

血小板分析的臨床應(yīng)用

血小板活化導(dǎo)致的血栓前綜合癥：如糖尿病、非免疫性血小板活化
血管缺陷導(dǎo)致的血小板活化：如動(dòng)脈粥樣硬化、急性心肌梗塞、血管成型術(shù)、心臟移植
血小板糖蛋白的基因缺失，或血小板存儲(chǔ)缺陷導(dǎo)致的出血性疾病
骨髓異常增生或骨髓發(fā)育不良、腎衰末期、血小板輸血或藥物副作用引起的血小板止血功能障礙
血小板相關(guān)的抗凝治療的診斷監(jiān)測
由特發(fā)性血小板減少或藥物引發(fā)的血小板減少、惡性腫瘤骨髓轉(zhuǎn)移導(dǎo)致的血小板生成減少
免疫性血小板減少、先兆子癇或膿毒癥造成的血小板生成增加；生長因子治療的骨髓反應(yīng)狀況監(jiān)測
自身免疫和同種免疫造成的血小板減少癥
流式細(xì)胞儀檢測全血中血小板功能狀態(tài)

全血中血小板更接近生理狀態(tài)
操作簡便，減少由于操作造成的血小板狀態(tài)改變(如血小板活化試驗(yàn))
同時(shí)檢測血小板的多個(gè)標(biāo)志物，結(jié)合FSC和SSC，評(píng)估多個(gè)參數(shù)，進(jìn)行定量分析
多采用血小板特異抗體CD41或CD61畫門，找出血小板，避免雜質(zhì)碎片的干擾
檢測血小板亞群靈敏度高
用血量少
無放射性污染

全血樣本的制備

1．抽取抗凝全血：檢測血小板功能時(shí)，應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)化的抽血規(guī)程；做血小板活化試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)盡量減少人為造成的血小板活化

2．Falcon管中加取全血和適量直標(biāo)熒光抗體，充分混勻，室溫避光處反應(yīng)，通常放置15分鐘

3．1%多聚甲醛固定樣本

4．上機(jī)檢測

質(zhì)控標(biāo)本

陰性對(duì)照(Isotype Control)：非特異熒光的強(qiáng)弱取決于抗體濃度、單克隆熒光抗體特異性和純度，應(yīng)與試驗(yàn)管抗體相對(duì)應(yīng)。在多色分析時(shí)，同型對(duì)照應(yīng)與其它抗體同時(shí)使用，以避免補(bǔ)償造成的誤差
血小板體外活化試驗(yàn)：使用正常人活化標(biāo)本作為陽性質(zhì)控；使用正常人未活化標(biāo)本作為陰性質(zhì)控
血小板自身抗體檢測：使用含有已知血小板抗體的血清與血小板孵育，作為陽性質(zhì)控；使用不含血小板抗體的血清與血小板孵育，作為陰性質(zhì)控
血小板表面抗原缺失：如巨血小板癥血小板表面CD42a/CD42b缺失，血小板無力癥血小板表面gpIIb/IIIa，即CD41/CD61缺失或異常。使用正常人標(biāo)本做陽性對(duì)照，抗體的同型對(duì)照做陰性對(duì)照