RIA常用的分離方法

 1．第二抗體沉淀法
其原理是用RIA反應中的試劑抗體(一抗)如豚鼠的IgG免疫另一種動物(如羊)，制得羊抗豚鼠IgG血清(一抗)。RIA反應結束時，加入二抗，使其形成抗原-一抗-二抗的雙抗體復合物；但因一抗含量甚微，此復合物也少，不易離心分離，一般還需加入一定量的與一抗同種動物的血清或IgG，使其與二抗形成較大量的可見沉淀物，與雙抗體復合物共沉淀；離心后，即可有效地分離B和F。也可將二抗與某些顆粒固相物連接，制成固相二抗，分離B、F效果也好。

2．聚乙醇(PEG)沉淀法
PEG能非特異地沉淀抗原抗體復合物等大分子蛋白質，而不沉淀小分子抗原，因此PEG被廣泛用于RIA實驗作沉淀劑。其優點是沉淀*，經濟方便，但非特異性沉淀較多，且當溫度高于30~C時，沉淀物易復溶。

3．PR試劑法
先將二抗與PEG按一定比例混合成懸液后進行試驗。是將二抗法和PEG法沉淀原理相結合的方法。此法保留了二者的優點，節省了二者的用量，且分離迅速，簡便。

4。活性炭吸附法
活性炭可吸附小分子游離抗原或半抗原，而大分子蛋白(如抗體和免疫復合物)則留在溶液中。抗原抗體反應后，加入活性炭顆粒，使游離的標記抗原(F)吸附到顆粒上，再離心使顆粒沉淀，上清液中含有的標記抗原抗體復合物(B)供測定。該法主要用于測定小分子抗原或藥物的RIA。