多克隆抗體技術之免疫動物

供免疫用的動物主要是哺乳動物和禽類，常選擇家兔、綿羊、山羊、馬、騾和豚鼠及小鼠等。動物的選擇常根據抗體的用途和量來決定，也與抗原的性質有關。如要獲得大量的抗體，多采用大動物；如要是獲得直接標記診斷的抗體，則直接采用本動物；如要獲得間接的標記診斷用抗體，則必須用異源動物制備抗體；如果難以獲得的抗原，且抗體的需要量少，則可以采用純系小鼠制備；一般實驗室采用的抗體，多用兔和羊制備。
免疫用的動物選擇適齡的健康雄性動物，雌性動物特別是妊娠動物用于制備免疫抗體則非常不合適，有時甚至不產生抗體。由于對免疫應答的個別差異，免疫時應同時選用數只動物進行免疫。
抗原是多種多樣的，而且千差萬別。就其化學成分而言，有蛋白質抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。就抗原性而言，有*抗原和不*抗原。為了獲得較好的抗血清，是選用蛋白質抗原，如要制備用于篩選細菌表達的cDNA文庫或免疫印跡的抗血清，選用可降解的蛋白質抗原。不同的抗原，其免疫原性的強弱均不相同，這種免疫原性的強弱取決于抗原的分子量、化學活性基團、立體結構、物理形狀和彌散速度等。
抗原的免疫劑量是依照給予動物的種類、免疫周期以及所要求的抗體特性等不同而不同。劑量過低，不能引起足夠強的免疫刺激，免疫劑量過多，有可能引起免疫耐受。在一定的范圍內，抗體的效價是隨注射劑量的增加而增高。蛋白質抗原的免疫劑量比多糖類抗原寬。一般而言，小鼠的免疫劑量為50μg～400μg/次，大鼠為100μg～1 000μg／次，兔為200μg～1 000μg/次。加強計量為劑量的1／5～2／5。
免疫劑量與注射途徑有關，一般而言，靜脈注射劑量大于皮下注射，而皮下注射又比掌內和跖內皮下注射劑量大，也可采用淋巴結內注射法。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小，對家兔而言，采用弗氏*佐劑，則需注射0.5mg～1mg/kg./次，如采用弗氏不*佐劑則注射劑量應大10倍以上。如要制備高度特異性的抗血清，可選用低劑量抗原短程免疫法。如需要獲得價的抗血清，宜采用大劑量長程免疫法。免疫周期長者，可少量多次。免疫周期短者，應大量少次。
兩次注射的間隔時間應長短適宜，太短起不到再次反應的效果，太長則失去了前一次激發的敏感作用。一般間隔時間應為5~7天，加佐劑者應為2周左右。
注射的Ig純度高，則一般不易引起過敏反應，如注射血清，即使是少量，在再次免疫時，極易引起過敏反應，所以一定要采取措施。