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如何確保固相多肽合成（SPPS）中的肽純度和產量

來源：岐昱實業（上海）有限公司 2023年03月17日 13:21

01/

如何測定肽純度

02/

不同標準下肽純度的應用

2.1

合成不同純度肽的應用指南

2.1.1

低純度（>50%）：該水平適用于先導化合物的高通量篩選。如果您正在研究免疫應答，除去特定的污染物，>70%可以用于抗原制備。

2.1.3

高濃度（>90%）：該水平適用于定量生物測定、定量體外受體-配體相互作用研究、配體結合的生物活性研究、定量阻斷和競爭性抑制試驗、定量磷酸化和蛋白水解研究、電泳標記和色譜標準分析。

03/

優化合成以達到所需濃度

3.1

合成前的關鍵優化步驟

3.1.1

序列分析：例如使用軟件在合成之前進行合成預測，以確定在整個合成過程中是否存在合成難度很大的區域。

3.2

固相多肽合成（SPPS）過程中關鍵步驟

3.2.1

樹脂選擇：SPPS通常在與1%二乙烯基苯（DVB）交聯的聚苯乙烯上進行。替代品包括聚乙二醇（PEG）衍生物，樹脂的選擇會影響合成成功率和粗品的純度。連接到柱上的連接物提供生長肽和固相載體之間的可逆連接，并確定最終產物的性質和可使用的化學性質。接頭的選擇決定了最終產物中的C端官能團。

3.2.3

反應溫度：提高溫度可能會加快合成并提高純度，但并不總是如此。需要注意的是，基于微波的加熱只是加熱，微波本身對合成沒有特殊影響。

3.2.5

雙重耦合：預測軟件確定的困難耦合可以通過雙重耦合、延長耦合時間或添加更多等效物來處理。

3.2.7

封端：這樣做是為了在偶聯反應后阻斷任何未反應的氨基，或使完整肽的N-末端乙酰化。它對于在合成困難或長肽期間最小化缺失產物和輔助純化過程是有很用的。

04/

選擇一種能夠快速合成高純度肽的多肽合成儀

4.1

用于篩選方法和試劑的平行反應容器

正如我們所看到的，優化可以涉及查看大量的變量，并行運行不同試劑組合的能力將大大加快優化過程。

4.3

溫度控制

提高溫度可以提高某些序列的純度。能夠同時測試不同溫度對提高生產率能力的影響。

4.5

稀有單體無需單次注射

特殊化學中使用的許多單體和試劑可能昂貴或珍貴，因此一些合成劑可從任何氨基酸/單體瓶位置提供免“單次注射”添加，以確保不會浪費任何東西。

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