蘇木素伊紅染色液的技術(shù)要點(diǎn)

蘇木素伊紅染色液套裝組合：Harris* 50ml，水溶性伊紅染色液 50ml，蘇木素染色分化液 50ml，蘇木素染色返蘭液 50ml

蘇木素伊紅染色是組織病理學(xué)經(jīng)典的常規(guī)染色方法，歷經(jīng)上百年的應(yīng)用歷史至今仍*。因此，蘇木素伊紅染色是病理切片制作中極為重要的技術(shù)環(huán)節(jié)。

染色方法：
1. 切片脫蠟 二甲苯I 5分鐘，
2. 切片脫蠟 二甲苯II 5分鐘，
3. 100％1、100％2、95％1、95％2、70％梯度乙醇各30，秒鐘，
4. 自來(lái)水流水沖洗1分鐘，
5. 蘇木素染色5—8分鐘（依染液新舊調(diào)整染色時(shí)間），
6. 自來(lái)水流水沖洗1分鐘，
7. 進(jìn)入分化液分化數(shù)秒鐘，
8. 自來(lái)水流水沖洗1分鐘，
9. 進(jìn)入返蘭液處理5—10秒鐘，
10. 自來(lái)水流水沖洗2分鐘，
11. 進(jìn)入伊紅染色液1-3分鐘，
12. 自來(lái)水沖洗30—60秒鐘，
13. 75％I、75％II乙醇脫水分色各10秒鐘，
14. 95%乙醇1、95%乙醇2各脫水10秒鐘，
15. 100％乙醇1、100％2脫水30-60秒鐘，
16. 二甲苯1、二甲苯2透明各1分鐘，
17. 中性樹(shù)膠封固。

染色技術(shù)要點(diǎn)：
*在靜止由于時(shí)染液表面于空氣中的氧分子接觸極液體代表面水分蒸發(fā)會(huì)產(chǎn)生氧化作用并形成氧化膜。因此，在使用前應(yīng)使用濾紙吸附去除氧化膜以免污染切片。一般情況下應(yīng)建立良好的使用習(xí)慣，每隔2～3天將蘇木素染液*過(guò)濾一次。為保證HE切片的 恒定染色質(zhì)量建議每500ml*染1200～1500張切片為宜。

*在用于免疫組織化學(xué)染色的的復(fù)染時(shí)應(yīng)注意調(diào)控染色時(shí)間，核染色過(guò)淺不易辨識(shí)組織結(jié)構(gòu)而核染色過(guò)深則喧賓奪主，一般復(fù)染的時(shí)間應(yīng)控在10-30秒以?xún)?nèi)。此外，復(fù)染后的分化和返蘭步驟不應(yīng)省略否則將造成整張切片呈淡藍(lán)色，使DAB呈現(xiàn)土黃色。

分化和返蘭步驟是HE染色關(guān)鍵點(diǎn)，應(yīng)在染色 實(shí)踐中依據(jù)分化液和返蘭液的新舊調(diào)整分化和返蘭的處理時(shí)間。在使用自動(dòng)染色機(jī)染切片是應(yīng)注意在機(jī)械臂運(yùn)行時(shí)分化液仍在進(jìn)行分化反應(yīng)，應(yīng)適當(dāng)縮短分化液處理掉時(shí)間或用70％乙醇適當(dāng)稀釋分化液以免分化過(guò)度。

70％乙醇對(duì)伊紅具有分色和脫色作用，使伊紅在不同的 組織結(jié)構(gòu)和 病變區(qū)域形成不同層次的 紅色。因此，伊紅染色以適當(dāng)深染為宜，以便在70％乙醇分色脫水后能顯現(xiàn)明顯的色階和色深度。

100％乙醇和二甲苯的純凈度是保證染色后切片透明度和顯微鏡下清晰度的重要前提，在濕度較大的情況下應(yīng)注意試劑的更換。干燥后封片是造成細(xì)胞核結(jié)構(gòu)不清的重要原因之一，應(yīng)盡可能避免。