紫外分光光度計的使用經(jīng)驗分享

雙光束掃描型紫外可見分光光度計是一類很重要的分析儀器，無論在物理學、化學、生物學、醫(yī)學、材料學、環(huán)境科學等科學研究領(lǐng)域，還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門，有廣泛而重要的應用。

雙光束掃描型紫外可見分光光度計的幾種定量分析方法：

(1)法 目前，法是紫外可見分光光度計諸多分析方法中使用較多的一種方法。

(2)標準法

(3)比吸收系數(shù)法 比吸收系數(shù)法多用于測定樣品溶液的濃度。但是，根據(jù)比耳定律，被測試樣溶液的濃度與吸光度應呈直線關(guān)系，而在實際測試中，如果試樣的濃度較高時，會發(fā)現(xiàn)實際測量到的吸光度值偏離線性關(guān)系。這種偏離比耳定律的原因，是由于雙光束掃描型紫外可見分光光度計的雜散光、噪聲、基線平直度和光譜帶寬，以及試樣的前處理、試樣的化學平衡等所引起的。因此，一般情況下，不采用這種方法。

(4)標準曲線法 常用的定量分析方法是標準曲線法。首先，用標準物質(zhì)配制一定濃度的溶液，然后，將該溶液配制成一系列的標準溶液。在一定波長下，測試每個標準溶液的吸光度，以吸光度值為縱坐標，標準溶液對應的濃度值為橫坐標，繪制標準曲線。將樣品溶液按標準曲線繪制程序測得吸光度值，在標準曲線上查出樣品溶液對應的濃度或含量。

(5)較小二乘法 較小二乘法實際上也就是回歸方程法。因為，分光光度法中試樣的吸光度A與試樣的濃度C之間的關(guān)系可用一條直線來描述。即c=aA+b（o、6為常數(shù)）。

應注意兩點：

①回歸方程是在特定條件下求得的，不能隨便套用；

②分光光度法中試樣的吸光度A與試樣的濃度c之間的關(guān)系，應建立在回歸方程中的取值范圍內(nèi)，否則，不能隨便外推。

(6)解聯(lián)立方程法 解聯(lián)立方程法只適用于兩個以上、在紫外區(qū)吸收峰互不重疊組分的測定，也不是常用的方法。

(7)示差分光光度法 不差分光光度法也不是雙光束掃描型紫外可見分光光度計應用中常用的方法。應注意三點：

①示差分光光度法中重要的是選擇適當濃度的參比溶液，參比溶液越接近樣品溶液，則測定的結(jié)果就越準確；

②示差分光光度法解決了普通分光光度法中不適用的高含量或痕量物質(zhì)的分析問題；

③示差分光光度法要求紫外可見分光光度計的穩(wěn)定性好、靈敏彥高（噪聲小、雜散光小）。