分光光度計在工作時要注意什么

使用紫外可見分光光度計進行定量和定性分析需注意以下一些問題：

1、吸光度讀數范圍：

吸光度測量誤差在透過率過大或過小時都會變大，為了滿足定量分析的誤差要求（<5%），在定量分析時要求吸光度應在一定的范圍內，這個范圍的具體值與儀器性能有關，主要是與紫外可見分光光度計檢測系統噪聲大小有關，但通常都在0.1~1.0范圍內，如果儀器的檔次更低，則范圍更窄。根據朗伯比爾定律，影響吸光度大小的因素主要是樣品摩爾吸光系數，濃度和比色皿光程。實驗中吸光度過大的樣品可通過稀釋樣品使吸光度到所需范圍內。如果樣品不能稀釋，可以改用光程較小的比色皿減小吸光度。吸光度過小的樣品可使用光程較大的比色皿以增大吸光度。

2、吸收波長的選擇：

進行單波長測量時，需要考慮朗伯比爾定律對入射光單色性的要求和測定靈敏度的要求。沒有干擾時，一般選擇在吸收峰的吸收波長位置處，如果有干擾，選擇在沒有干擾且吸光度變化較平緩的位置。進行多波長校正時，除盡量滿足單波長測定的波長要求外，還要求多個組分間的吸收光譜間線性無關。

3、狹縫的選擇：

狹縫的大小會影響到儀器的信噪比和標準曲線的線性范圍。狹縫過大，通常會使線性范圍變小，特別是當不在吸收波長位置測定時更是如此。狹縫過小，信噪比變差，基線平直度和測量數據的重復性會變差。此外，還需要考慮樣品吸收峰寬度的影響。通常單波長測定時，一般選擇在吸收波長位置，線性范圍容易滿足，可選擇較寬的狹縫（1~2nm）多波長測定時，很難同時在所有波長都滿足線性范圍要求，應選擇比較小的狹縫。

4、重復測定次數和波長掃描速度：

對吸光度不是很大的樣品，或者狹縫不是很小，這是檢測器檢測的光信號的強度是比較大的，重復性較好，可選擇較少的重復次數。相反，如果樣品吸光度很大，狹縫很小，選擇較大的重復次數可獲得更好的結果。

5、測定波長間隔：

在掃描光譜時需要選擇，可根據樣品吸收峰的寬度進行選擇，峰寬較大時，可選擇較大的波長間隔。反之亦反。通常每個正常的吸收峰應該用不少于30個數據點表示出來。