乳制品中三聚氰胺的LC-MS分析測定

三聚氰胺（Melamine）簡稱三胺，學(xué)名三氨三嗪，別名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。三聚氰胺含氮量為66.6％，折合成粗蛋白含量為416.27%，加入寵物飼料和牛奶中可以大幅提高蛋白質(zhì)測定表觀含量，但食用后可誘發(fā)腎衰竭并導(dǎo)致死亡，因此一直禁止在飼料和食品中使用。2007年，國內(nèi)外發(fā)生多起寵物因食用添加了三聚氰胺的寵物食品而致死的例子，大量相關(guān)產(chǎn)品被召回。2008年9月，國內(nèi)發(fā)生奶粉中三聚氰胺導(dǎo)致嬰幼兒腎結(jié)石和腎功能衰竭甚至死亡的惡性事件。
　　本文建立對(duì)乳制品中三聚氰胺的單四級(jí)桿液質(zhì)分析測定方法，以電噴霧離子化方式正離子模式監(jiān)測，化合物的[M+H]+作為定量分析用的選擇性檢測離子,解決有時(shí)在液相分析時(shí)色譜分離不*及定性信息不充分的問題, 從而避免液相色譜紫外測定時(shí)樣品假陽性情況。

1. 實(shí)驗(yàn)及方法
1.1 裝置概要
　　本實(shí)驗(yàn)使用Shimadzu LCMS-2010EV液相質(zhì)譜儀，C-20AD*，SIL-20AC自動(dòng)進(jìn)樣器，CTO-20AC柱溫箱,含LC-20AD*，SIL-20AC自動(dòng)進(jìn)樣器，CTO-20AC柱溫箱，DGU-20A3在線脫氣機(jī), LCMSsolution 3.20工作站軟件。

1.2 試劑
　　甲醇：　色譜純
　　乙腈：　色譜純
　　氨水：　濃度25%-28%
　　　　　　飽和乙酸鉛溶液
　　緩沖液：配制含10mM檸檬酸和10mM辛烷磺酸鈉的緩沖液，調(diào)節(jié)pH值到3.0
　　氨水甲醇溶液：量取5mL氨水，溶解于100mL甲醇中

1.3 樣品前處理
　　固體樣品取樣2g，液體樣品取樣5g，準(zhǔn)確加入9mL緩沖液溶液，加入1mL乙酸鉛溶液。搖勻，劇烈震蕩25min，10000r/min離心5min，取上清液。分別用3mL甲醇，3mL水活化混合型陽離子交換固相萃取柱，加入2mL（液體樣品3mL）上清液上柱。依次用0.1mol/L鹽酸水溶液3mL水和甲醇3mL洗柱，抽近干后用氨水甲醇溶液3mL洗脫。洗脫液50℃氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)?0％乙腈溶解，0.45um濾膜過濾，上機(jī)測定。

1.4 分析條件
　　色譜柱：CAPCELL PAK CR（1:4） 4.6×150mm ,5μm；
　　流動(dòng)相：乙睛/10mM NH4Ac (50:50)，
　　　　　 冰醋酸調(diào)節(jié)混合液至pH=3；
　　流速： 1.5mL/min (約0.3mL/min進(jìn)質(zhì)譜)；
　　柱溫： 30℃；
　　進(jìn)樣量：10μL；
　　質(zhì)譜參數(shù)：電噴霧離子化ESI(＋)，
　　　　　　 霧化氣: 1.5L/min，
　　　　　　 干燥氣: 0.1MPa，
　　　　　　 CDL 溫度：250℃，
　　　　　　 加熱塊溫度：200℃，
　　　　　　 檢測器電壓: 1.6 kV。 ||

2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.1 掃描方式結(jié)果見圖1及圖2

圖1　 TIC (+)


圖2 　SCAN (+) [M+H]+ m/z 127

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線
　　三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取50mg（精確到0.1mg）的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，用70%乙腈溶液溶解并定容于100mL容量瓶中，該溶液濃度為0.5mg/mL。
　　稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液分別得到0.1μg/mL, 0.5μg/mL, 1μg/mL, 5μg/mL, 10μg/mL,50μg/mL分別進(jìn)樣，得到校準(zhǔn)曲線如圖3所示。質(zhì)譜分析中選擇性離子監(jiān)測方式(SIM), m/z 127

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y = 410,165.3X + 261,083.0 (Y- 峰面積) 相關(guān)系數(shù)為0.9996，線性關(guān)系良好, 檢出限為50ppb||

2.3 標(biāo)準(zhǔn)品精密度數(shù)據(jù)
　　取濃度為1μg/mL三聚氰胺標(biāo)樣，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果如表1所示。

　　表1 保留時(shí)間與峰面積的重現(xiàn)性

　　由表1結(jié)果可見，本方法測定三聚氰胺具有良好的精密度和重現(xiàn)性。

2.4 樣品譜圖結(jié)果
　　實(shí)際樣品譜圖結(jié)果見下圖

圖4 空白液態(tài)奶



圖5 空白液態(tài)奶加標(biāo)準(zhǔn)品

3. 結(jié)論
　　單四級(jí)LCMS-2010EV分析乳制品三聚氰胺可以避免液相色譜紫外檢測樣品時(shí)假陽性結(jié)果, 并且其成本比使用串聯(lián)質(zhì)譜分析低, 可以很好的滿足乳制品中三聚氰胺的分析測定要求。