滬鼎生物教您如何細(xì)胞活化與復(fù)蘇

很多小伙伴做實驗會用到細(xì)胞，那么我們在收到細(xì)胞時該如何處理呢？
首先收到細(xì)胞株包裹時，請檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請立即通知。細(xì)胞株請盡快開始培養(yǎng)，或立即冷凍保存。

細(xì)胞復(fù)蘇的原則－快速融化：
必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害。

一. 實驗前準(zhǔn)備：

1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃

2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。

二．取出凍存管：

1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號。

2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時核對管外的編號。

三．迅速解凍：

1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化。

2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺內(nèi)。

四.平衡離心：

用架盤天平平衡后，放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min

五.制備細(xì)胞懸液：

1.吸棄上清液。

2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液。

六.細(xì)胞計數(shù)：

細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。

七、冷凍細(xì)胞解凍程序

1.依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單認(rèn)定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它認(rèn)定之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類，若因?qū)嶒炐枰仨氂兴煌瑫r， 務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行所需之實驗。

2.FBS(fetal bovine serum,胚牛血清),CS(calf serum, 小牛血清)和HS(horse serum,馬血清)，對細(xì)胞而言差異極大，請務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單認(rèn)定之血清種類培養(yǎng)之。

3.將培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫，回溫后噴以70% 酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管，立即放入37°C 水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后，以70% ethanol擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。

4.依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無菌操作臺內(nèi)取10ml培養(yǎng)基加至T25或T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入T25或T75 flask內(nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入37°C，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

5.對絕大多數(shù)細(xì)胞而言，1%以下之冷凍保護(hù)劑DMSO，不會對細(xì)胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍細(xì)胞中去除，待第二天確定細(xì)胞生長或貼附良好后再去除即可。唯對極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會造成細(xì)胞分化之細(xì)胞，需立即去除DMSO者。