ELISA實(shí)驗(yàn)疑難問題解答

ELISA實(shí)驗(yàn)做了很多次，可是結(jié)果還是有偏差？可能很多同學(xué)都會(huì)出現(xiàn)這樣的問題，那么問題到底出在哪呢，今天小編就來(lái)給大家總結(jié)一下，ELISA實(shí)驗(yàn)中會(huì)經(jīng)常遇見的問題。

1.非正常的樣本值
①不正確的收集或保存
解決方案：確保正確的底物體積混合。如果底物是凍干粉，用相應(yīng)緩沖液重懸*，充分混合并在一定時(shí)間內(nèi)使用。
②不正確的樣本制備
說(shuō)明書中樣本制備方法已經(jīng)過(guò)性能測(cè)試驗(yàn)證，嚴(yán)格按照說(shuō)明書推薦進(jìn)行。確保使用正確的校正稀釋液。

2.信號(hào)強(qiáng)度增長(zhǎng)不充分
①底物準(zhǔn)備有誤
解決方案：確保正確的底物體積并混合。如果底物是凍干粉，用相應(yīng)緩沖液重懸*，充分混合并在一定時(shí)間內(nèi)使用。
②每孔底物添加體積有誤
解決方案：保證移液器正常工作，必要時(shí)進(jìn)行重新校正。保證移液器吸頭連接緊密。
③孵育時(shí)間或溫度有誤
解決方案：嚴(yán)格按照推薦的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，避免在環(huán)境條件變化的位置孵育96孔板（如放在通風(fēng)處或窗臺(tái)邊）。
④偶聯(lián)物或底物準(zhǔn)備有誤
解決方案：確保混合相同體積的偶聯(lián)物和底物。加入后會(huì)立即顯色。底物在使用前應(yīng)避光保存。
⑤儀器設(shè)置不正確
解決方案：確保酶標(biāo)儀使用了正確的濾光片，確保按照說(shuō)明書，正確的配置儀器參數(shù)。

3.邊緣效應(yīng)
①工作臺(tái)溫度不均衡
解決方案：避免在環(huán)境條件變化的位置孵育，如放在通風(fēng)處或窗臺(tái)邊。
②體系液體蒸發(fā)
解決方案：保證移液器正常工作，必要時(shí)進(jìn)行重新校正。保證移液器吸頭連接緊密。
③疊板
孵育時(shí)避免疊板。