凱氏定氮法 ST-08A定氮儀應用與操作方法

一、簡介

蛋白質的測定方法，目前仍以1883年凱達爾氏(Kiedahl)發明的定氮法為基礎，它根據各種蛋白質都具有固定比數的氮這一事實，通過對氮的測定而推算出蛋白質含量，此法所得的含氮量除了確定屬于蛋白質組成成分的氮以外，還包括非蛋白質組成的其他有機及無機態氮，所以換算所得的蛋白質含量稱作為粗蛋白含量，一般蛋白質中的含量為18%，換算后即每6.25克蛋白質中含有1克氮，因此6.25成為換算系數K，但是不同的農產品及其制品的實際含氮量有區別，所以不同農產品必須采用不同的換算系數，如花生、大豆、蠶豆、大麥、小麥、燕麥、黑麥等含氮為17.6%，求得K=5.7，蕎麥、葵花籽、亞麻籽、麻籽、棉花籽、蓖麻籽等換算系數則為K=5.50，玉米、菜籽為6.00，水稻為5.95，上述以外的其他農產品的換算系數均適用6.25。盡管如此，目前世界上還沒有直接分離測定含蛋白質的可行方法。因此，迄今為止在國內外凱氏定氮法仍然是測定蛋白質含量的經典方法。所得結果準確、穩定。

山東盛泰儀有限公司生產的全自動定氮儀（蛋白質測定儀），是引進消化吸收國內外檢測新技術，結合我國國情，應用凱氏定氮法原理，采用化學與物理學相結合完成的成套蛋白質含量快速測定裝置。為糧食、食品、飼料、農業、商檢等檢測部門提供了理想的檢測設備。

二、操作方法  山東盛泰儀器有限公司廠家直供

1.試劑制備

     A.硫酸(比重1.84)

B.NaOH溶液:400g NaOH 溶于1000mlH2O中

C.2%H3BO3

     D.0.1NHCL

E. 催化劑:硒+無水硫酸鈉(1:1000)或硫酸銅等

F.指示劑:0.1%甲基紅+0.5%溴甲酚綠(1:1)

2.樣品消化

  稱取經粉碎通過40-60目/寸樣0.5-1克(視含氮量而定)無損地置入已洗滌烘干的消化管中加催化劑5克左右和10ml左右硫酸。 將消化管分別放入消化架各個孔內，然后置于消化爐上，然后開啟抽氣三通上自來水，使抽氣三通處于吸氣狀態，接通電源，在加熱初始階段防止樣品飛濺。（選用電壓型控溫的消化爐起先控制在150伏左右，15分鐘左右后可滿電壓工作），（選用數顯型消化爐起先控制在200度左右，20分鐘左右后再設定所需溫度）。

3．蒸餾（結構圖上有Δ標記工作必需做）

     （ST-O4A為例）蒸餾器中，堿液及蒸餾水采用電磁泵加入，機器側面標簽NaOH、H2O注入接口用橡膠管套入后分別置入自備的容器中，加液時按面板上相應開關，液體由泵吸入消化管內，注入毫升數視標尺所注位置而定。（一般堿液加量是消化時硫酸用量5倍以上，加蒸餾水量15毫升左右）

1．打開電源，打開自來水，接冷卻水自來水不必開過大，出水口有水流出即可，用排水管子上夾子夾緊排水管子。

開面板上右邊蒸氣開關手柄往上推為開蒸氣，同時把左邊進水開關手柄往上推為開，待電流表指針指在1A—2A時如果水進入側面蒸發爐慢，電流表長時間沒反應，請用吸合球往正面的細長管內吹幾下以排除管內空氣，看示意圖指示馬上關把左邊進水開關手柄往下壓，壓到底壓不下為關（盡量不要關太慢，防止電流過大而燒壞15A保險絲），待蒸氣管噴出氣后又上推打開左進水開關供水，2分鐘左右后電流穩定在3.5A-6A左右后，關閉右蒸氣開關手柄往下壓到底，壓不下為關。因為紅色進水開關是控制機器內部產生蒸氣的水源開關，從側面的有機玻璃窗口內可以看到蒸發爐水位的高低，防止水位過高，因為一開始水沒有沸騰，水不斷進入，容易使電流過大而燒壞保險絲。蒸氣開關是起通斷蒸氣作用，也是水源進入蒸發爐和排除蒸發爐水（實驗結束時）的排水器件。（如果蒸氣出來后電流不大請開關一下紅色蒸氣開關會正常。（上推為開，下壓為關））

2．在250mL三角接收瓶中加入50mL2%H3BO3和2-3滴混合指示劑，蒸餾時間設定6-8分鐘，并使接收瓶托架盤往上移，使滴管浸沒在液體中，然后按時控開關（也可不用開）。

3．向上扳動側面紅球手柄把消化管固定在左邊托架上，然后按面板上開關分別加入H2O、NaOH 液體，然后上推蒸氣開關，向試管內注入蒸氣，進行蒸餾樣品，在接收瓶內接收液達150mL左右時移下接收瓶，用蒸餾水沖洗滴管口繼續蒸餾半分鐘，然后取下接收瓶，待滴定用，關蒸氣開關。第二個樣品只要放上后，加好液，上推蒸氣開關既可，不要關電源。

4．滴定.

用0.1NHCL滴定接收瓶內的溶液，滴定溶液由綠色變成淡紫色時為止，記下消耗HCL的毫升數，按下列式子計算蛋白含量：

蛋白含量（%）=（V-V0）N  0.014  A  100

                 ————————————

                           W

式中：V----消耗HCL的毫升數

             V0-----實驗時消耗HCL的毫升數

             N----- HCL的當量濃度

             0.014----1ml HCL的克當量數

             A---固定系數（6.25、5.7、5.3等）

             W----試樣重量g （測定：用0.1克糖代替樣品或不加樣品作測定）

4、關機

關電源、關水、打開排水夾子，兩紅球開光上推，取下消化管，擦干凈機器。