兔子Ⅱ型膠原elisa檢測試劑盒標本的采集及保存以及操作步驟

兔子Ⅱ型膠原elisa檢測試劑盒標本的采集及保存：
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 其它生物標本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
4. 樣本處理：血清或血漿標本推薦稀釋5,000倍。

兔子Ⅱ型膠原elisa檢測試劑盒操作步驟：
1.待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。 
2.酶標板置4℃，包被過夜。
3.洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
4.陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
5.酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。 
6.洗板，同（4）。 
7.每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
8.酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。 
9.洗板，同（4）。 
10.每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。 
11.每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。 
12.分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13.數據處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。