1、選擇細胞:鏡檢細胞,選擇成長狀態杰出,細胞界限明晰,具有立體感,形態好無污染、無異常及可疑病變細胞。
2、配制細胞培養液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養液100ml 內,加入滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。
3、消化細胞:先用PBS 洗液沖洗細胞外表1-2 次,每次10m1,棄去洗液,向細胞瓶內加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細胞瓶平放,使消化液*覆蓋細胞外表。
4、至細胞*脫落到胰酶中:每瓶加入10m1 細胞培養液吹打渙散細胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1 細胞培養液重復吹打一次后分裝,然后補加至所需培養量。
5、加塞,置于37±1℃孵箱培養。約2~4 天成片(由細胞接種濃度決定)。
6、填寫傳代記載。
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