蝦肝腸微胞蟲探針法熒光定量PCR試劑盒數據處理分析

蝦肝腸微胞蟲探針法熒光定量PCR試劑盒數據處理

1. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。

2. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復一次。重復實驗的 Ct值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 35，則為陽性。

注意事項：
建議加樣順序是陰性質控品、待檢樣本、陽性質控品。4. PCR擴增（擴增區）
1)     儀器設置（以ABI Prism 7500為例）
將PCR反應管放入PCR儀內，按照對應順序設置陰性質控品(NTC)、陽性質控品(Standard)及待檢樣本(Unknown)。Reporter Dye為FAM，Quencher Dye為None，參比染料(Passive Reference)為None。
2 ）   擴增程序