IEC-6細胞|大鼠小腸隱窩上皮細胞IEC-6 處理方法

IEC-6細胞|大鼠小腸隱窩上皮細胞IEC-6 處理方法
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外大學建系
細胞形態特性：詳見細胞說明書

5571-36-8
IEC-6[IEC6] Cell
細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分
IEC-6[IEC6] Cell；大鼠小腸隱窩上皮細胞
細胞產品包裝：復蘇形式：T25培養瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)
NCI-H1651細胞系；細胞傳代方法：1：3-1：8傳代，每周換液2次；細胞形態特性：上皮細胞；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
A-431[A431]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
HHORSC細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
TFH細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：懸??；細胞背景資料：輔助性T細胞
可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態好與不好至關重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養的細胞開始的幾代長的還挺好的，可是穿過幾代之后就發現自己的細胞不行了，狀態越來越差勁了。對于這個問題，可以非常肯定地說，你的消化環節出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入*后，所有細胞都在被*消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加*，倒掉舊培養基加入少量新培養基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養，以與后面*消化過的細胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細胞對*的敏感度了）3)吸干凈瓶內剩余液體，加入0.3ml左右的*潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的*消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉*，加入新培養基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的*重新加進去瓶里繼續消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的*，如果你們那比較富裕的話，繼續鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉*，加入新培養基吹打。懸液傳入新瓶培養（依據實際情況把握）。

<1>本公司的豬鼻甲黏膜成纖維細胞，PT-K75發貨有四種形式：T25瓶、離心管、血清及干冰。
T25是用T25細胞培養瓶直接發貨的形式。收到細胞后，拆開包裝T25瓶的自封袋，不拆封口膜，表面噴75%酒精消毒后顯微鏡觀察細胞狀態（有條件可以拍下此時細胞照片）。將細胞放入37度培養箱平衡兩小時以上，再處理細胞。首先將T25中培養基取出裝好備用，如細胞密度高于80%，可以直接消化傳代，相反則加入5-6mL培養基放回培養箱繼續培養即可。
離心管是用15mL離心管發貨的方式，只用于懸浮細胞發貨。收到細胞后消毒處理及平衡參考上述T25瓶。平衡完成后，離心（1000rpm，3min）收集細胞，棄上清，用新的培養基重懸細胞并接種至培養瓶或皿中，放回培養箱繼續培養。
血清是用牛血清直接發貨的形式，是細胞凍存管加入含有細胞的牛血清的形式。收到細胞后，拆開自封袋，凍存管表面噴75%酒精消毒后，在超凈臺中打開凍存管，將細胞用1mL槍頭輕輕幾次以將細胞吹勻，接種至含有預熱的培養基的培養瓶或皿中，顯微鏡下觀察細胞是否吹勻，如果沒有吹勻，繼續吹勻至3-5個細胞一團，放回培養箱繼續培養。
干冰是用本公司凍存液凍存細胞后，直接用干冰將凍存的細胞冷凍發貨的形式。收到細胞后按照細胞復蘇的步驟操作即可。
<2>相關問題
如不能在收到后及時操作細胞，T25及離心管發貨的細胞可以消毒后在37度過夜，血清發貨的細胞可以在室溫下靜置1-2天（注意不要放冰箱），干冰發貨的可以在確認干冰未*升華時將細胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰*升華，請即刻復蘇細胞。
T25瓶及離心管在培養箱平衡是為了讓細胞盡快適應培養箱環境，同時使部分因運輸導致脫落的細胞貼壁，此步驟非常必要。T25瓶如果在顯微鏡下可以看到部分不貼壁的細胞，可以收集上清后離心（1200rpm，5min）后，將沉淀用新的培養基重懸后接種至新的培養瓶或皿中。
部分細胞在運輸過程中，由于不斷震蕩及環境不適，可能導致細胞破碎死亡，從而使培養基中漂浮很多細胞碎片及顆粒狀物質。這種情況下，平衡后，貼壁細胞用PBS洗兩遍在加新的培養基培養或者傳代至新瓶中培養即可；懸浮細胞可以離心（1000rpm，3min）收集細胞，并用PBS重懸后再離心一次，再用新的培養基重懸并接種細胞。