人elisa定量檢測試劑盒實驗是不是也遇到過這些問題?

人elisa定量檢測試劑盒實驗是不是也遇到過這些問題?
蛋白質印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。WB實驗作為科研研究中實驗其中一種方法，卻蘊含了很多知識，可謂是小實驗里卻有大文章。針對WB實驗經常遇到的一些問題，上海滬鼎生物技術專員總結出了應對的一系列“5點”注意事前及建議，希望能幫助到您！
實驗的5點注意事項：
1.陽性對照對裂解物用來表明實驗室有效并且是正確的，及可證明目標蛋白不在樣本表達。
2.跑在樣品旁邊的分子量標準能測定蛋白分子量的大小并且能監測電泳的進展。
3.避免手指直接接觸膜，應使用鑷子，手指上的油脂與蛋白會封閉轉膜效率并易產生背景污斑。
4.確認裁剪的膜和濾紙與凝膠尺寸相同，邊緣太大會導致在進行轉膜時電流不能通過膜。
5.過度曝光的膠片不適合用于分析，因為不能判定相對蛋白量。
解決無信號的5點建議：
1.二抗需和一抗宿主的物種相同（如一抗來自兔，二抗為抗兔抗體）。原因： 一抗和二抗不匹配。
2.參照說明書，設置陽性對照。原因：一抗不識別檢測物種蛋白。
3.每泳道蛋白上樣量不低于20~30μg，設置陽性對照。原因：抗原量不足。
4.使用可逆染色劑如麗春紅S檢測轉膜效果，檢測轉膜操作是否正確。PVDF膜預先浸在甲醇中。原因：轉膜不充分。
5. 使用含0.5%脫脂奶粉或更換封閉劑，減少封閉時間。原因：過度封閉使目標蛋白不能顯色。
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