ELISA實驗中的封閉液等常用試劑的配制

一、elisa實驗中的封閉液小知識

ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點，蔗糖封閉的原理：

1、ELISA實驗中，蔗糖本身沒有封閉作用;

2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。

3、加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保護劑”的作用。

4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經過BSA封閉后加，當然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數選擇前者。封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可)，0.4%的明膠，但是實驗表明前者比較好，后者不容易洗干凈未結合上的明膠。封閉劑的原理就是與酶聯板上未結合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上，結合抗體或抗原的時候就不會產生非特異結合了，不會影響實驗的準確度。

二、tween的作用：雖然不能單獨封閉，但和BSA在封閉時會起到清洗非特異性結合或結合不牢固的蛋白的作用，假如抗體包被在板上會出現YY-<yy的情況，在用tween后會出現yy p="">

三、附件：ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置

ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總如下：(1)　ELISA實驗包被緩沖液(2)　ELISA實驗洗滌緩沖液(2)　ELISA實驗洗滌緩沖液(3)　ELISA實驗稀釋液;(4)ELISA實驗終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實驗TMB(四甲基聯苯胺)使用液(7)　ELISA實驗ABTS使用液(8)ELISC。

試劑

(1)　ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):

NaHCO3需1.59克，NaHCO3需2.93克，加蒸餾水至1000ml

(2)　ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M

KH2PO4需0.2克，Na2HPO4·12H2O需2.9克，NaCl需8.0克，KCl需0.2克，Tween-20需0.05%需0.5ml，加蒸餾水至1000ml

(3)　ELISA實驗稀釋液：牛血清白蛋白(BSA) 0.1克，加洗滌緩沖液至100ml，或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

(4)　ELISA實驗終止液(2M　H2SO4)：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。

(5)　ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml，0.1M 檸檬酸(19.2克/L)需24.3ml，加蒸餾水50ml。

(6)　ELISA實驗TMB(四甲基聯苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml無水乙醇) 0.5ml，底物緩沖液(PH5.5)需10ml，0.75%H2O2 32μl

(7)　ELISA實驗ABTS使用液:ABTS需0.5mg，底物緩沖液(PH5.5)需1ml，3%H2O2 2μl

(8)ELISA實驗封閉液：牛血清白蛋白(BSA) 5克，加洗滌緩沖液至100ml。

注：值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。

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為了保證ELISA實驗的準確性，實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔，嚴防交叉污染。

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