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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1、把聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì)電泳轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上。
a. 轉(zhuǎn)移緩沖液洗滌凝膠和硝酸纖維素膜,將硝酸纖維素膜鋪在凝膠上,用5ml移液管在凝膠上來(lái)回滾動(dòng)去除所有的氣泡。
b. 在凝膠/濾膜外再包一張3mm濾紙(預(yù)先用轉(zhuǎn)移緩沖液浸濕),將凝膠夾在中間,保持濕潤(rùn)和沒(méi)有氣泡。
c. 將此濾紙/凝膠/薄膜濾紙按照廠(chǎng)家建議方法放入電泳裝置中,凝膠面向陰極。
d. 將上述裝置放入緩沖液槽中,并灌滿(mǎn)轉(zhuǎn)移緩沖液以淹沒(méi)凝膠。
e. 按照廠(chǎng)家所示接通電源開(kāi)始電泳轉(zhuǎn)移。
f. 轉(zhuǎn)移結(jié)束后,取出薄膜和凝膠,棄去凝膠。
2、將薄膜漂在氨基黑中快速染色,直至分子量標(biāo)準(zhǔn)顯現(xiàn)時(shí)取出,記錄下標(biāo)準(zhǔn)位置。
3、用100ml水洗滌纖維素膜,必要時(shí)可用脫色緩沖液。
4、膜置印跡緩沖液中于37℃保溫1小時(shí)。
5、室溫下,用PBS-Tween緩沖液洗滌薄膜。
6、用封口機(jī)將薄膜封入塑料袋中,盡可能不留空氣。
7、袋的一角剪一緩沖液的小口,用透析袋夾緊。
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