ELISA試劑盒小技巧改變實驗誤差大問題

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ELISA試劑盒小技巧改變實驗誤差大問題：
A、由于滴瓶的精密性肯定不如加樣器，不排除不同滴頭滴量的誤差，另外滴加過程中是否產生氣泡、速度是否均勻，是否顫動等影響液量的因素均可導致以上情況，高標準要求時應使用加樣器。
B、肉眼觀察稍顯色，酶標儀打印為陰性的標本在實際工作中是難以避免的，肉眼目測結果不可靠，應以酶標儀判讀為準。
C、不同的ELISA試劑盒廠家產品其生產工藝和操作方法會略有不同，務必按照所用試劑盒嚴格操作，否則容易產生檢測結果的不確定性。
D、加樣時樣品量誤差，對于陰或很陽的標本影響不大，但對閾值附近的標本影響極大，建議校對加樣器。
E、反應時間的誤差，做大量標本時，*孔和zui后一孔以及一些特殊標本可能影響較大。
F、由陰性變為強陽性原因多為操作過程中漏加試劑等有關。
G、若不同批號試劑的不同組分(A液或酶工作液)，或不同試劑的不同組分進行交叉使用，有可能出現顯色淺或本底高，花板等情形。
 

ELISA試劑盒進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1）固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等，其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。
（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間，吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時，進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值，選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度，對于多數蛋白質來說通常為1～10μg／ml。

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