培養(yǎng)細(xì)胞需注意

1）切記，細(xì)胞培養(yǎng)基的儲存條件是2-8℃。如果細(xì)胞培養(yǎng)基不小心被凍，您應(yīng)該融化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基。 

2）貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基，可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時，*導(dǎo)致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口，在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15min，來校正溶液的pH值(確定松開瓶口以保證氣體交換)。 

3） 當(dāng)在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結(jié)合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活，可能對于細(xì)胞達(dá)到毒性水平。 

4）一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。 

5）總之，大部分添加物和試劑zui多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會影響它的性能。 

6）血清的熱滅活在免疫分析時可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅活血清。熱滅活是以往*的操作步驟，并沒有確鑿的證據(jù)說明這樣做是有益的。相反，對大部分細(xì)胞而言，GIBCO和HyClone都不推薦熱滅活血清。因?yàn)榧訜峥赡苁寡逯械某恋碓黾樱鼓`以為污染。 

7）在進(jìn)行傳代培養(yǎng)時，我們強(qiáng)烈推薦進(jìn)行臺盼蘭活性記數(shù)。研究者常常通過一個簡單的稀釋(1∶4或1∶2)進(jìn)行傳代，不進(jìn)行活性檢測，您可能接種比你認(rèn)為的低得多的濃度的細(xì)胞，這常常可能導(dǎo)致生長緩慢或培養(yǎng)物根本不生長。 

8）在訂購的細(xì)胞到達(dá)后，應(yīng)立即復(fù)蘇，如果培養(yǎng)基還沒有準(zhǔn)備好，可將其放入液氮中，盡快復(fù)蘇。千萬不能放置在-20或-80℃的冰箱內(nèi)。 

9）細(xì)胞復(fù)蘇往往是比較容易出問題的步驟。請在訂購細(xì)胞時就向供應(yīng)商索取詳細(xì)的復(fù)蘇步驟，并仔細(xì)閱讀。有些供應(yīng)商就不推薦在復(fù)蘇時離心，對此類細(xì)節(jié)，應(yīng)特別留意。 

10）如何避免血清中沉淀物的產(chǎn)生? 

11) 解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。并隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

12) 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。 

13) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。 

14) 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30min的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。