液相色譜法測定紫花苜蓿青貯中的有機酸

紫花苜蓿是豆科苜蓿屬多年生草本植物，可以加工成苜蓿草粉，作為家畜配合飼料的主要原料使用，起平衡日糧氨基酸、提供豐富的維生素的作用，并提供纖維素。紫花苜蓿莖葉中含有豐富的蛋白質、礦物質、*及胡蘿卜素，特別是葉片中含量更高。

苜蓿青貯或半干青貯，養分損失小，包括半干青貯，加甲酸青貯，拉伸膜青貯等三種技術紫花苜蓿（Medicago sativa）青貯之后，原料中的可溶性糖等在植物酶或微生物作用下，部分轉化為乳酸、乙酸、丙酸、丁酸等有機酸，青貯飼料的PH下降，抑制有害微生物的繁衍。

乳酸的測定有蒸餾法、液相色譜法、酶法等，乙酸、丙酸、丁酸等揮發性脂肪酸的測定常用氣相色譜法。本方案采用極性較強的離子交換色譜柱，用液相色譜儀對紫花苜蓿青貯飼料的浸提液進行有機酸測定，探討了用液相色譜儀一次性測定乳酸和揮發性脂肪酸方法的可行性與準確度。

本方法樣品處理過程簡單，分離效果理想，相對標準差低，回收率好，具有良好的重現性和精密度，同時測定紫花苜蓿青貯浸提液中的乳酸、乙酸、丙酸、丁酸，約20min即可分離*，所以用HPLC測定紫花苜蓿青貯飼料中有機酸更為簡單、方便、快捷。

儀器

LC600B等度液相色譜儀（南京科捷分析儀器有限公司），包括LC600B高壓恒流泵1臺、SPD600B紫外檢測器1臺、SCL600B系統控制器1臺、8725i手動進樣閥1只、反控色譜工作站1 套（內置反控主機）、液相色譜柱1根等。

樣品處理

準確稱取20g紫花苜蓿青貯，加入200mL蒸餾水，均質1min，4層紗布過濾，濾液用試紙精濾，再用0.45μm濾膜過濾，浸提液待測。

色譜條件

色譜柱：Shodex KC-811色譜柱300mm×8mm

流動相：3mM高氯酸

柱溫：50℃

檢測波長：210nm

流速：1mL/min

進樣量：5μL

色譜圖

1 乳酸；2 乙酸；3 丙酸；4 丁酸