液相色譜-電噴霧質譜聯用法分析羅漢果皂甙

   摘要：【目的】建立羅漢果皂甙的HPLC/ESI/MS2 定性分析方法。【方法】采用液相色譜-電噴霧質譜聯用法對羅漢果皂甙提取物進行分離分析。【結果】根據主要色譜峰的質譜特征，初步鑒定出羅漢果皂甙提取物中主要的皂甙成分為11-氧-羅漢果皂甙V（11-oxo-mogroside-V）、羅漢果皂甙V（mogroside-V）、羅漢果皂甙IV（mogroside-IV）、羅漢果皂甙VI（mogroside-VI）和賽門甙I（siamenoside-I）。【結論】對于羅漢果皂甙的分離及定性分析，液相色譜-電噴霧質譜(HPLC／ESI/MS2)聯用分析法是一種方便快捷有效的方法。
    關鍵詞：羅漢果(Siratia grosvenori)；羅漢果皂甙；液相色譜-電噴霧質譜聯用法
    羅漢果是廣西特產中藥，研究表明，強甜味的非糖物質三萜類成分羅漢果皂甙（mogroside）是其主要成分[1,2]。羅漢果皂甙屬*烷型化合物，種類較多，結構相似，迄今已從羅漢果果實中分離并鑒定出11 種葫蘆烷三萜甙類（cucurbitane glycoside）化合物[3～5]。
    羅漢果皂甙的藥理作用已有研究[6～9]，因此建立快速、準確的羅漢果皂甙分析鑒定新方法，對其生物活性的研究具有重要理論意義。若采用薄層色譜法或高壓色譜法等傳統方法分析檢測羅漢果皂甙提取物中的羅漢果皂甙，需用標準樣品進行定性分析，但羅漢果皂甙的標準樣品目前尚無供應廠商，自行分離或合成標準樣品則費時費力，因此給羅漢果皂甙的定性分析帶來諸多不便。
    電噴霧（ESI）是一種軟電離技術，能夠有效地收集離子和提供大量的碎片信息，易于與液相色譜聯用（HPLC/MS），這種聯用技術具有分析速度快、分辨率高和靈敏度高的特點，并且具有對分析的樣品進行快速定性的能力，已廣泛應用于藥物的檢測和定性及其它領域。有關皂甙類化學成分的液質聯用分析已有報道[10]，但對羅漢果中主要皂甙成分的液相分析及其電噴霧質譜研究尚未見報道。本文利用液相色譜-電噴霧-質譜／質譜聯用的方法分離羅漢果皂甙提取物，并對其中的主要皂甙成分進行了定性分析，方法簡便快速。

    羅漢果皂甙提取物的制備
    取500.00 g 羅漢果鮮果搗碎后用8 倍的水于80℃下提取3 次，每次1 h，過濾，收集濾液，于60℃下真空濃縮后調pH 9.0，然后上大孔樹脂D101 柱，依次用蒸餾水、30%乙醇溶液、60%乙醇溶液進行洗脫，收集60%乙醇洗脫液后，經真空濃縮、冷凍干燥即得2.50 g 羅漢果皂甙提取物，經分光光度法分析[11,12]，該提取物的總皂甙
含量≥98%。

    HPLC/ESI/MS 分析
    樣品溶液的配制：準確稱取羅漢果皂甙提取物0.0100 g，用23%乙腈溶解并定容至10 ml。
    色譜條件：柱型：Hypersil ODS C18 柱（250 mm×4.6mm ID，5 μm）；流動相：乙腈∶水∶NH4Ac=23∶77∶0.05；柱溫：30℃；流速：0.3 ml·min-1；進樣量：1.0 μl。
    質譜條件：ESI 離子源電離，噴射電壓：5 000 V；毛細管溫度：250℃；噴射壓力：25.0 PSI；干燥氣流速：8.0 L·min-1；干燥氣溫度：250℃；掃描質量范圍：100～1700 amu。負離子模式。

    ESI/MS2 分析
    ESI 離子源電離，噴射電壓：3 500V；毛細管溫度：250℃；噴射壓力：20.0 PSI；干燥氣流速：8.0 L·min-1；干燥氣溫度：350℃；掃描質量范圍：100～1700 amu。負離子模式。

參考文獻略

文章摘自:《中國新藥與臨床雜志》2005年7月,第24卷，第7期
作者：劉世坤, 裴奇,李佐軍,周于祿,李兵