常見發酵染菌難題問答----發酵搖瓶機

Q1: 為什么噬菌體在搖瓶階段沒有被發現？

回復：在搖瓶階段，一般不會往搖瓶里面通氣。因此在搖瓶階段染噬菌體的幾率比較少。如果經過長時間培養后，空氣中存在大量噬菌體，Z終也會導致搖瓶培養發生污染，這時需要對搖床內部做熏蒸等滅菌措施。

 Q2: 大腸桿菌發酵過程中,出現一定的自溶情況,鏡檢有空泡現象。但是平板檢測，無噬菌斑出現。請問這是什么原因造成的?

回復：自溶情況是在培養哪個階段發生呢？如果出現在培養中期就發生自溶，有可能感染噬菌體。涂平板檢查是否有噬菌斑，應該盡量采用雙層平板，效果較好。此外，在產物產量及其他發酵參數都正常情況下，是不是因為攪拌轉速較高，到對數后期后會有一部分菌體發生自溶現象。

 Q3: 如果是接種的超凈臺環境中有噬菌體,是不會進入種子搖瓶啊?

回復：會的，接種時超凈工作臺風是又上往下吹的，所以一般在超凈臺內操作時，我們盡量減少瓶口敞開的時間，而且盡量將搖瓶斜放，減少超凈臺內的氣體進入瓶內。

 Q4: 想知道處理芽孢染菌時為什么需要用堿水處理發酵罐呢?

回復：根據過去做過的實驗，將分離出來的芽孢桿菌，分別在不同 pH 值培養基中進行培養，發現在酸性的環境里，芽孢桿菌能生長很好，而在堿性環境里卻無法生長; 此外，若罐體內部存在一些結垢，經過稀堿水處理后，結垢將變得松散，從而內部芽孢桿菌也能夠釋放出來，便于滅菌殺死

 Q5:甲醇如何滅菌?

回復：純的甲醇一般不需要除菌，本身應該無菌。如果是甲醇溶液，那需要除菌，但不是放滅菌鍋內滅菌，而是過濾除菌。裝甲醇的補料瓶需要放入滅菌鍋滅菌，若擔心滅菌效果不好，可加水滅菌。過濾除菌時一定慎選過濾器種類，必須為抗有機溶劑，以避免過濾器在過濾過程中被甲醇腐蝕，一般采用PTFE，PP，PVDF，PES材質都可以耐受甲醇。此外，甲醇過濾完也可以做無菌培養實驗。過程操作務必小心，一旦甲醇揮發會有毒性。

 Q6:請問芽孢桿菌消滅劑是什么？84消毒液可以嗎？

回復：當時使用的芽孢桿菌殺菌劑為諾福殺菌劑，內含過氧化氫、活性膠質銀離子等等；84消毒液主要成分是次氯酸鈉，效果有限，因此沒有前者好用。

 Q7: 補料瓶未連接前玻璃接頭接的是包扎的空氣過濾器嗎?

回復：補料瓶管線出來所連接的玻璃接頭為公頭，然后通過母頭和公頭連接兩邊管路。母頭的一端需加過濾器，若無過濾器，也可采用包扎的方式。除菌過濾器用錫箔紙包住，主要防止滅菌過程中有冷凝水浸濕過濾器，同時可以保證此處的滅菌溫度，棉花塞住不是太方便。

 Q8:罐內死角不容忽視，發酵罐聯軸器形式，哪種死角比較少，螺絲用厭氧高溫密封膠涂抹可以嗎?

回復：進口發酵罐罐內不會有死角，此概念在設計中已充分考慮。一般發酵罐采用直連驅動馬達，而細胞罐采用磁力驅動馬達。該兩種驅動軸設計上不會有死角，謹記使用過程中不要隨意卸載或晃動攪拌軸，導致密封圈密封性不佳即可。 您所提及的螺絲是罐蓋上面的嗎？在攪拌軸上的是可以涂抹，能否告訴我你要涂抹是的哪些螺絲？ 此外，密封膠質量要有保證，不會在滅菌時進入罐內影響菌體生長和產物純化

 Q9:芽孢桿菌及大腸桿菌在外觀大小上區別為何?

回復：以枯草芽孢桿菌為例，大小一般為0.7～0.8×2～3微米，芽孢大小一般為0.6～0.9×1.0～1.5微米；大腸桿菌大小一般為0.4～ 0.7×1 ～3微米。

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