大鼠肺微血管內皮細胞*培養(yǎng)基操作方法 返回列表頁

產品名稱：大鼠肺微血管內皮細胞*培養(yǎng)基操作方法
英文名稱：Rat pulmonary microvascular endothelial cell growth medium
規(guī)格：100mL
產品貨號：FS-X0312
大鼠肺微血管內皮細胞*培養(yǎng)基操作方法的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
大鼠肺微血管內皮細胞*培養(yǎng)基操作方法收到后的處理：
1）收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4）如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5）接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們取得。
培養(yǎng)操作流程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備F-12K培養(yǎng)基（F-12K，GIBCO,貨號21127-022），90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換 液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；
      1，細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml*，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
      2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x10E6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。
      3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

    含量：        規(guī)格:    20mg/支
戊菌唑 標準品  號：66246-88-6 100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
戊菌隆 標準品  號：66063-05-6 100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
硝草胺 標準品  號：40487-42-1 100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
嘧啶并三唑類磺胺 標準品  號：219714-96-2 1ml    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
 87-86-5 2ml    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
氯菊酯(順反異構體混合物) 標準品  號：52645-53-1 250mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
苯敵草 標準品  號：13684-63-4 100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
苯醚菊酯 標準品  號：26002-80-2 100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
苯氧甲基*(鉀鹽) 標準品  號：132-98-9 250mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
稻豐散 標準品  號：2597-O3-7 100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
甲拌磷 標準品  號：298-02-2 100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
伏殺硫磷 標準品  號：2310-17-0 100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
亞胺硫磷 標準品  號：732-11-6 100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
磷胺 標準品  號：13171-21-6 100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
辛硫磷 標準品  號：14816-18-3 100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
毒莠定 標準品  號：250mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
PICOLINAFEN 標準品  號：137641-05-5 250mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
殺鼠酮 標準品  號：83-26-1 250mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
增效醚 標準品  號：100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
戊草凈 標準品  號：24151-93-7 250mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
抗蚜威 標準品  號：23103-98-2 250mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
 甲基嘧啶磷 標準品  號：29232-93-7 250mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
多氧霉素 標準品  號：19396-06-6 100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
* 標準品  號：55268-74-1 250mg    進口/國產    英文名稱        含大鼠肺微血管內皮細胞*培養(yǎng)基操作方法量：        規(guī)格:    20mg/支
 氫化* 標準品  號：50-24-8 250mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
甲基氟嘧磺隆 標準品  號：86209-51-0 250mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支
烯丙苯噻唑 標準品  號：27605-76-1 100mg    進口/國產    英文名稱        含量：        規(guī)格:    20mg/支