人腎成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法 返回列表頁

產(chǎn)品名稱：人腎成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法
英文名稱：Amediumof human renalfibroblasts
規(guī)格：100mL
產(chǎn)品貨號：FS-X0247
人腎成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法的運(yùn)輸和保存
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
人腎成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法收到后的處理：
1）收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2）請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4）如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5）接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉?/a>。
培養(yǎng)操作流程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基（F-12K，GIBCO,貨號21127-022），90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換 液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
      1，細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml*，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
      2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
      3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

111830-201001    規(guī)格:    20mg/支
酸漿苦味素L    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供鑒別用    含量：    111831-201001    規(guī)格:    20mg/支
苷松新酮    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供鑒別用    含量：    111832-201001    規(guī)格:    20mg/支
6-姜辣素    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量：    111833-201001    規(guī)格:    20mg/支
1-甲基海因    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供鑒別    含量：    111836-201001    規(guī)格:    20mg/支
去氫二異*    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量：    111838-201001    規(guī)格:    20mg/支
川楝素    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量：    111842-201001    規(guī)格:    20mg/支
安五脂素    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供鑒別用    含量：    111844-201001    規(guī)格:    20mg/支
23-乙酰澤瀉醇B    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111846-201001    規(guī)格:    20mg/支
紫草氰苷    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供鑒別用    含量：    111847-201001    規(guī)格:    20mg/支
3,6-二芥子酰基蔗糖    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定    含量：    111848-201001    規(guī)格:    20mg/支
細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定    含量：    111849-201001    規(guī)格:    20mg/支
遠(yuǎn)志口山酮    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定    含量：    111850-201001    規(guī)格:    20mg/支
桔梗皂苷D    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定    含量：    111851-201001    規(guī)格:    20mg/支
寶藿苷Ⅰ    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量：    111852-201001    規(guī)格:    20mg/支
王不留行黃酮苷    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量：    111853-201001    規(guī)格:    20mg/支
槲皮素-3-O-β-D- 葡萄糖    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量：    111854-201001    規(guī)格:    20mg/支
偽原*（暫行）    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量：    111855-201001    規(guī)格:    20mg/支
巴豆苷    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量：    111856-201001    規(guī)格:    20mg/支
新*    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量：    111857-201001    規(guī)格:    20mg/支
絡(luò)石苷    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量：    111858-201001    規(guī)格:    20mg/支
α-松油醇（暫行）    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    鑒別    含量：    111859-人腎成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法201001    規(guī)格:    20mg/支
楊梅苷    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量：    111860-201001    規(guī)格:    20mg/支
竹節(jié)參皂苷ⅠVa  （暫行）    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用    含量：    111861-201001    規(guī)格:    20mg/支
三百草酮    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    供含量測定用