Hep G2 人肝癌細(xì)胞系操作方法 返回列表頁(yè)

產(chǎn)品名稱：Hep G2 人肝癌細(xì)胞系操作方法
英文名稱：HepG2a human hepatocellular carcinoma cell line
規(guī)格：5×105cells/瓶
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-X0108

Hep G2 人肝癌細(xì)胞系操作方法的運(yùn)輸和保存
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
Hep G2 人肝癌細(xì)胞系操作方法收到后的處理：
1）收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2）請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4）如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5）接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉?/a>。
培養(yǎng)操作流程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基（F-12K，GIBCO,貨號(hào)21127-022），90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換 液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
      1，細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml*，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
      2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
      3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

長(zhǎng)梗冬青苷    英文名稱：    Pedunculoside    :    42719-32-4    分子式：     C36H58O10     650    20mg
毛冬青酸    英文名稱：    Ilexolic acid    :        分子式：            20mg
*    英文名稱：    Ligustrazine Hydrochloride    :    76494-51-4    分子式：    C8H12N2.xClH    172.65762    20mg
川芎嗪    英文名稱：    Tetramethylpyrazine    :    1124-11-4    分子式：    C8H12N2    136.19    20mg
草質(zhì)素    英文名稱：    Herbacetin    :    527-95-7    分子式：    C15H10O7    302.237    10mg
臭椿酮     英文名稱：    Ailanthone    :    981-15-7    分子式：    C20H24O7    376.403    10mg
醋戊曲酯     英文名稱：    acevaltrate    :    25161-41-5    分子式：    C24H32O10        10mg
 橙花叔醇    英文名稱：     Nerolidol    :     7212-44-4    分子式：    C15H26O    222.37    20mg
查斯曼寧堿    英文名稱：    Chasmanine    :         分子式：     C25H41NO6    451.6    20mg
川翠定甲    英文名稱：    Bonvalotidine A    :        分子式：    C27H41NO8        20mg
刺囊酸    英文名稱：    Echinocystic acid     :    510-30-5     分子式：    C30H48O4    472.71    10mg
查斯馬寧    英文名稱：    Chasmanine    :    "5066-78-4
"    分子式：    "C25H41NO6 
"    "451.61
"    20mg
粗壯女貞苷N（95%）     英文名稱：    "Ligurobustoside N
"    :        分子式：    "C35H46O18
"    "754.74
"    10mg
催吐蘿芙木定    英文名稱：    Mitoridine    :    3911-19-1    分子式：    C25H41NO6    "322.41
"    10mg
車葉草苷    英文名稱：    ASPERULOSIDE    :        分子式：            20mg
大車前苷    英文名稱：    Plantamajoside    :    104777-68-6    分子式：    C29H36O16    640.2    20mg
高車前苷    英文名稱：    Homoplantaginin    :    17680-84-1    分子式：    C22H22O11    462.4    10mg
高車前素    英文名稱：    Hispidulin    :    1447-88-7    分子式：    C16H12O6    300.26    20mg
大黃素甲醚    英文名稱：    Emodin-3-methyl ether    :    521-61-9    分子式：    C16H12O5    284.26    20mg
大黃酸    英文名稱：    Rhein    :    478-43-3    分子式：    C15H8O6    284.22    20mg
大黃酚    英文名稱：    Chrysophanic acid    :    481-74-3    分子式：    C15H10O4    254.24    20mg
大黃素    英文名稱：    Emodin    :    518-82-1    分子式：   Hep G2 人肝癌細(xì)胞系操作方法 C15H10O5    270.24    20mg
雙醋瑞因    英文名稱：    1,8-Diacetoxy-3-carboxyanthraquinone    :    13739-02-1    分子式：     C19H12O8    368.29    20mg
大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷    英文名稱：    Emodin-8-O-β-D-glucopyranoside    :    23313-21-5    分子式：     C21H20O10    432.41    20mg
 土大黃苷    英文名稱：     Rhaponticin    :    155-58-8    分子式：    C21H24O9    420.41    20mg