豚鼠絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）elisa定量檢測試劑盒 操作步驟

豚鼠絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)elisa定量檢測試劑盒
操作步驟：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl?！?/p>

（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。

（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

（4）陰性對照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1：500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。　

（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min?！?/p>

（6）洗板，同（4）?！?/p>

（7）每孔加1：5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。　

（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。　

（9）洗板，同（4）。　

（10）每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。　

（11）每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)?！?/p>

（12）分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，終測得的od值為兩者之差（w1-w2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。