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    TCEP 溶液,0.5M5mL操作步驟

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    更新時間:2017-07-19 14:56:16瀏覽次數:1247次

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    TCEP 溶液,0.5M5mL操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

    TCEP 溶液,0.5M5mL操作步驟詳細說明書:

    TCEP 溶液,0.5M5mL操作步驟產品及特點:
    SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發了本產品。它具有下列特點:
    1.
    一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
    2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
    3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質的要求。
    4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
    5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
    TCEP 溶液,0.5M5mL操作步驟對于組織樣品:
    1. 把*切成細小的碎片。
    2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
    3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解 液的用量。)
    4.
    用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
    5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
    6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
    TCEP 溶液,0.5M5mL操作步驟對于培養細胞樣品:
    1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM
    2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
    3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
    鹽酸-L-白酰-2-奈胺100

    Percoll 100ml/1L 原裝 Pharmacia17089101

    環辛酮,英文名或英文縮寫:Cyclooctane,級別:BR,97%,規格:25

    4,7-二本基-1,10-啰啉 Bcthophqncnthrolinq 166-01-7

    鄰本二酸二辛酯,英文名或英文縮寫:DIOP,級別:CP94%,規格:100
    兔血清(無菌)500

    1317-40-4硫化銅COPPER(II) SULFIDE

    鄰硝基本胺125ku

    1,2,4-*氧基苯 1,2,4-Trimethoxybenzene,97% 135-77-3 5G 通用試劑

    滌丹諾忻系統適用性合劑 Didcnosinq SystqM Suitcbility Mixturq 69622-02-6
    ABTSSUBSTRAIQUIDABTS, 液體底物超純級無色至微綠色溶液COLDsigma

    12027-67-7鉬酸銨(四水)Hexaammonium molybdate

    2-amino-6-fluoro-Benzo[b]thiopxene-3-carbonitnile 221061-09-2

    (二苯基膦)甲烷 Bis(diphenylphosphino)methane,97% 2071-20-7 1G 表面活性劑

    L-Tyrosinediwo7iumsaltL-酪酸二鈉鹽25克昆蟲細胞培養級,
    PROC Others Human PROC1 / Protein C / PROC 人細胞裂解液 (陽性對照)

    人皮膚鱗癌細胞;A-431 [A431]

    小鼠皮層神經膠質細胞(EGFP標記)

    3T6細胞,小鼠胚胎成纖維細胞 人前列腺癌細胞,gpc-1細胞 人視網膜色素上皮細胞RNAHRPEpiC miRNA5 μg

    恒河猴腎細胞;RM-3

    EPCAM Others Human EpCAM 人細胞裂解液 (陽性對照)
    人皮膚鱗癌細胞;A-431 [A431]

    PROC Others Human PROC1 / Protein C / PROC 人細胞裂解液 (陽性對照)

    小鼠皮層神經膠質細胞(EGFP標記)

    3T6細胞,小鼠胚胎成纖維細胞 人前列腺癌細胞,gpc-1細胞 人視網膜色素上皮細胞RNAHRPEpiC miRNA5 μg

    恒河猴腎細胞;RM-3

    EPCAM Others Human EpCAM 人細胞裂解液 (陽性對照)
    TCEP 溶液,0.5M5mL操作步驟FLT4 Others Mouse 小鼠 FLT-4 / VEGFR3 人細胞裂解液 (陽性對照)

    小鼠腎足細胞;Mouse podocyte

    人小腦星形膠質細胞( Hac) (1×106 )

    人導管瘤細胞;UACC812 大鼠腎系膜細胞*培養基 100mL

    Lewis 小鼠肺癌細胞

    SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細胞系

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