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    caspase-8染色試劑盒100T實驗方法

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    更新時間:2017-07-07 11:47:07瀏覽次數:497次

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    caspase-8染色試劑盒100T實驗方法PA319(人大腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2

    人口腔角質細胞總RNAHOK tRNA

    IL1R2 Others Human IL1R2 / IL1RB / CD121b 人細胞裂解液 (陽性對照)

    MDA-MB-415細胞,人癌細胞 鼠胚成纖維細胞系,STO細胞 原代成纖維細胞特制基礎無血清培養基Many types of cells包裝:500/100ml

    CL-0334EB-3(Burkitt淋巴瘤細胞)5×106cells/瓶×2

    HDLEC Pellet 人類皮膚淋巴管內皮細胞團塊(少年者) > 1 mio.cells 少突膠質前體細胞生長添加物OPCGS

    caspase-8染色試劑盒100T實驗方法使用注意事項
    1.微量試劑取用前請 離心集液。
    27-AAD避光保存及使用。
    37-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
    4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數量不以應低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
    caspase-8染色試劑盒100T實驗方法操作方法
    1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
    2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應515min;
    3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細胞;
    4.請在1 hour內,進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
    A.熒光顯微鏡觀察
    1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
    2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養細胞并誘導細胞凋亡;
    1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡,并設立陰性對照組;
    2)用PBS洗滌細胞兩次;
    3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
    4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
    5)避光、室溫反應5 min。
    3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發波長546nm,發射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
    B.流式細胞儀分析
    用流式細胞儀檢測,激發波長Ex=546 nm; 發射波長Em=647 nm
    7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
    caspase-8染色試劑盒100T實驗方法實驗步驟
    貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結合。
    1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
    2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細胞;
    3)細胞洗滌:用預冷1×PBS4)重懸細胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細胞;
    4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細胞;
    5Annexin V-FITC標記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
    6PI標記:上機前5分鐘再加入5μLPI染色。
    7)上機前,補加200μL1×Binding Buffer。
    MDA-MB-231(ATCC來源), 人癌細胞

    GPC3 Others Mouse 小鼠 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

    人正常前列腺上皮細胞;RWPE-1

    狗腎細胞隆突型;MDCK superdome T細胞,CTLL-2細胞 RTE細胞,大鼠氣管上皮細胞

    人胚腎細胞;293 [HEK-293]

    HA Others Influenza B 乙型流感 (B/Malaysia/2506/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)
    LAG3 Others Rat 大鼠 LAG3 / CD223 / Lymphocyte activation gene 3 人細胞裂解液 (陽性對照)

    人類原巨核細胞型白血病細胞;UT-7

    CM-R026大鼠骨髓基質細胞*培養基100mL

    MKN-45細胞,人低分化胃癌細胞 人神經母細胞瘤細胞,BE(2)C細胞 非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2

    CRFK(貓腎細胞) 5×106cells/瓶×2

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