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真菌核蛋白提取試劑盒100T使用說明書使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數量不以應低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
產品名稱：真菌核蛋白提取試劑盒100T使用說明書
儲存條件：蛋白酶抑制劑-20℃保存； 蛋白提取液2-8℃保存。

有效期：一年。

產品簡介：

真菌核蛋白提取試劑盒是一種基于化學而非去污劑方法的高產核蛋白提取試劑盒。真菌核蛋白提取試劑盒可以從各種大型真菌（蕈菌）中提取核蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及核蛋白制備。提取過程簡單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質量的蛋白提供了。

真菌核蛋白提取試劑盒100T使用說明書操作方法
1．懸浮細胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞；
4．請在1 hour內，進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞；
2．對于貼壁細胞來說，也可直接用蓋玻片來培養細胞并誘導細胞凋亡；
（1）將細胞于蓋玻片上生長，用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡，并設立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發波長546nm，發射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測，激發波長Ex=546 nm; 發射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
真菌核蛋白提取試劑盒100T使用說明書實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細胞收集。懸浮細胞收集：離心5分鐘；貼壁細胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細胞；
（3）細胞洗滌：用預冷1×PBS（4℃）重懸細胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞；
（5）Annexin V-FITC標記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
賓鼠尾草Salvia dugesii Tilifodiolide none 126724-95-6 C20H16O5 ≥98%

異牡荊苷Isovitqxin970-2-820mg

莽草酸 Shikimic acid 138-59-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

含量測定*100893-200601常溫，避光100mg

1,5-二酰奎寧酸;洋薊素，洋薊酸，朝鮮薊酸，朝薊素，菜薊素 1,5-Dicaffeoylinoneic acid 30964-13-7 20mg HPLC≥98% 用
2-耐酚 2- naphthol 50mg/支

香紫蘇醇ThqfrcgrcntPqrillcclcohol212-03-7HPLC≥98%，20mg/vial

羊藿次苷I Icarisid I 56725-99-6 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

供殘留溶劑檢查用本130109-200901常溫，避光1ml

虎杖苷;云杉新苷;白藜蘆醇苷 Polydatin 27208-80-6 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
南美蟛蜞菊Wedelia trilobata Tetrachyrin none 73483-88-2 C20H28O2 ≥95%

氧化石蒜減Rqdspidqrlilyclkclioxidction7210-4-420mg

絡緦 Rosin 85026-55-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

檢查用左*100872-200801常溫，避光50mg

靈芝酸C6 Ganoderic acid C6 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
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