植物線粒體膜蛋白提取試劑盒50T使用說明書 返回列表頁

植物線粒體膜蛋白提取試劑盒50T使用說明書使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數量不以應低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
產品名稱：植物線粒體膜蛋白提取試劑盒50T使用說明書
儲存條件：蛋白酶抑制劑-20℃保存； 提取液2-8℃保存；膜蛋白溶解液室溫保存。

有效期：一年。

產品簡介：

線粒體(mitochondria)是真核細胞中產生能量的重要細胞器，細胞中的能源物質—脂肪、糖、部分氨基酸在此進行終的氧化，并通過偶聯磷酸化生成ATP，供給細胞活動之需。跨膜蛋白承擔各種生物功能，在生物的各種發展過程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質譜分析等應用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰。

植物線粒體膜蛋白提取試劑盒50T使用說明書操作方法
1．懸浮細胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞；
4．請在1 hour內，進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞；
2．對于貼壁細胞來說，也可直接用蓋玻片來培養細胞并誘導細胞凋亡；
（1）將細胞于蓋玻片上生長，用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡，并設立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發波長546nm，發射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測，激發波長Ex=546 nm; 發射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
植物線粒體膜蛋白提取試劑盒50T使用說明書實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細胞收集。懸浮細胞收集：離心5分鐘；貼壁細胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細胞；
（3）細胞洗滌：用預冷1×PBS（4℃）重懸細胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞；
（5）Annexin V-FITC標記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
云南草蔻Alpinia blepharocalyx 5,7,4'-Tri-O-metxylcatechin 5,7,4'-三-O-甲基兒茶精 105330-59-4 C18H20O6 ≥95%

秦皮速cqsculinHPLC≥98%，20mg/支

桔梗皂苷D2;桔梗皂甙D2 Platycodin D2 66663-90-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

含量測定鹽酸扶*100844-200802常溫，避光100mg

風信子素;2-(1-乙氧代乙氧代)乙基本 2-(1-Ethoxyethox
24757-70-8 克拉曲濱相關物質A標準品 20mg

訶黎勒鞣花酸 23094-71-5 C41H30O27 ≥98% 左卡泥汀雜質A;肉毒減雜質A(L0 99905

磺菌安標準品 扶噻甲草酯標準品 扶酰安標準品

*雜質Q標準品118074-07-010mg*雜質Q標準品

*B 6199-67-3 HPLC≥95%;20mg 訂購|咨詢
楤木 Aralia 2g

異補骨脂速Isopsoralen23-20-HPLC≥98%，20mg/vial

etxyllucidone (2Z)-2-[(2E)-1-乙氧基-3-本基-2-丙烯-1-亞基]-4-甲氧基-4-環烯-1,3-二同 1195233-59-0

京尼平苷梔子苷24512-63-8Geniposide

異綠原酸B;3,4-二酰奎寧酸 Isochlorogenic acid B;3,4-Dicaffeoylinoneic acid 14534-61-3 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
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