線粒體蛋白提取試劑盒100T實驗方法 返回列表頁

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線粒體蛋白提取試劑盒100T實驗方法儲存條件：線粒體試劑AB于2-8℃保存，*存放于-20℃保存；蛋白裂解液室溫保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。

有效期：一年。

產品簡介：

線粒體蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等哺乳動物組織中提取線粒體蛋白。提取過程簡單方便。制備的線粒體蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

線粒體蛋白提取試劑盒100T實驗方法實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細胞懸液每50～100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養液中，稀釋至10uM ，處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光；而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞：
（1）取 10～60 萬細胞，重懸于 0.5mL 細胞培養液中，細胞培養液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
線粒體蛋白提取試劑盒100T實驗方法注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質，在操作時請注意避光。在處理和標記時，盡可能在暗處進行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后，在暗室內用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作，以免影響細胞狀態。
（5）在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內進行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
西蘭花 Brassica oleracea L. var. botrytis L. Sulforaphane 蘿卜硫素 4478-93-7 C6H11NOS2 ≥98%

姜皇速CurcuminHPLC≥98%;20mg/支

擬人參皂苷-Rh2 3-O-β-D-glucopyranosyl-3β,12β,25-trixy7noxyldammar-(E)-20(22... 1370264-16-6 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

對照品頭孢羥安芐0431-9501含量測定

Pelargonidin
220127-57-1 甲磺酸*標準品(-20℃) 100mg

相思子Abrus precatorius 紅豆減 21339-55-9 C12H14N2O2 ≥98% 乙二醇本迷(P0950000

Sarcandrolide D 1207185-03-2

metxysergide 馬來酸美西賣角標準品129-49-7 350mg馬來酸美西賣角標準品

女貞苷 260413-62-5 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
長春花 Catharanthus roseus (L.)G.Don Vincristine sulfate 長春新堿 2068-78-2 C46H56N4O10 .H2O4S ≥98%

異去輕鉤藤減Isocorynoxqinq21014-9-020mg

人參皂苷Rg1;人參皂甙Rg1 Ginsenoside Rg1 22427-39-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

含量測定* 100991-200901常溫，避光100mg

濱蒿內酯;6,7-二甲氧基;七葉內酯二甲醚;蒿屬香豆精;東喘寧 Scoparone;6,7-Dimetxoxycoumarin 120-08-1 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
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