細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中三個主要瓶頸

核型正常的細(xì)胞培養(yǎng)在植板（plating）之后只有少數(shù)能夠分裂，而且它們的子細(xì)胞還會出現(xiàn)持續(xù)性的死亡，很少能形成可以*增殖的克隆。

Sheffield大學(xué)的Peter Andrews教授和Daniel Coca教授*研究團(tuán)隊，對單個人類胚胎干細(xì)胞進(jìn)行了延時成像，并由此鑒定了限制干細(xì)胞生長的主要瓶頸。研究顯示，在*培養(yǎng)過程中發(fā)生了適應(yīng)性突變的干細(xì)胞，受到的生長限制有所緩解，能夠進(jìn)行更有效的擴(kuò)增。

Sheffield大學(xué)的Dr Ivana Barbaric說：“我們研究胚胎干細(xì)胞，是因?yàn)樗鼈冇谐蔀槿魏渭?xì)胞類型的潛力。通過體外培養(yǎng)獲得大量未分化的胚胎干細(xì)胞，是用這些細(xì)胞進(jìn)行治療的前提。問題是這些細(xì)胞在體外培養(yǎng)時容易大量死亡，擴(kuò)增效率比較低。”

“在*體外培養(yǎng)的條件下，胚胎干細(xì)胞能夠通過自發(fā)突變，提高自己的生長能力。為了安全使用這些細(xì)胞進(jìn)行治療，我們需要了解培養(yǎng)條件對細(xì)胞的影響，以及細(xì)胞對此做出的適應(yīng)。”

研究人員將延時顯微成像、單細(xì)胞追蹤技術(shù)和數(shù)學(xué)模型結(jié)合起來，對普通胚胎干細(xì)胞和已經(jīng)適應(yīng)培養(yǎng)的干細(xì)胞進(jìn)行了比較。他們從中確定了影響克隆形成的三個主要瓶頸：植板后的細(xì)胞生存情況、細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂的情況、以及分裂后的細(xì)胞死亡情況。

研究顯示，在同樣的培養(yǎng)條件下，已經(jīng)適應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)在上述三個方面表現(xiàn)更好，能夠形成更多的克隆。此外，增加細(xì)胞間的接觸或者添加促進(jìn)細(xì)胞生存的化合物，也能緩解這三方面的問題。
    20mg/支    HPLC≥98%    白楊素-6-C-葡萄糖基-8-C-阿拉伯糖甙
Camptothecine    20mg/支    HPLC≥98%    *
Euhorbiasteroid    20mg/支    HPLC≥98%    續(xù)隨二萜醇
Lathyrol    20mg/支    HPLC≥98%    千金子二萜醇
Borneol    20mg/支    HPLC≥98%    龍腦
5-hydroxymethyl-2-furaldehyde    20mg/支    HPLC≥95%    5-羥甲基糠醛
β-Carotene    20mg/支    HPLC≥90%    β-胡蘿卜素
Patchouli alcohol    20mg/支    HPLC≥98%    百秋李醇
Dehydrocostus Lactone    20mg/支    HPLC≥98%    去氫木香內(nèi)酯
Costunlide    20mg/支    HPLC≥98%    木香烴內(nèi)酯
細(xì)胞培養(yǎng)