細胞培養(yǎng)的操作步驟

1. 細胞培養(yǎng)潛伏期（latent phase） ：

接種 經過 懸浮期（細胞質回縮,胞體呈圓球形） 貼壁。

初代培養(yǎng)細胞 經過 10～24小時或更多時間。 連續(xù)細胞系和癌細胞系 經過 10～30分鐘 貼附。 貼附現象是一個非常復雜和受多種因素的影響。 影響細胞貼附：底物表面不干凈，影響細胞貼附。 利于細胞貼附：底物表面帶有陽性物質與特殊物質:
纖粘連蛋白（fibronectin FN）、 

細胞表面蛋白（cell surface proteinCSP） 

這些物質有的存在與細胞表面,有的來自血清。 

潛伏期特點： 

長短與細胞接種密度、種類、使用的培養(yǎng)基性質有關。 

（1）細胞貼附后進入潛伏期,細胞無增殖。少見分裂相，細胞有運動活動。 

（2）初代培養(yǎng) 細胞潛伏期約為24～96小時或更長， 

連續(xù)細胞系和腫瘤細胞潛伏期約6～24小時。 

（3）細胞接種密度大潛伏期短。

（4）細胞出現分裂相增多時，標志細胞進入指數增生期。

2．指數增生期（logarithmic growth phase）： 

特點：細胞增殖旺盛階段,分裂相增多。

細胞分裂指數（mitotie index MI） ： 

表示每1000個細胞中的分裂相數。 

條件：分裂相數與細胞種類、培養(yǎng)成分、pH培養(yǎng)箱溫度有關。

細胞分裂指數： 

初代細胞：在0.1％～0.5％之間％ ,

連續(xù)分裂細胞和腫瘤細胞：3 ～5％。 

指數增生期是作為細胞一代活力的時期,是進行實驗和主要的階段。 

指數增生期持續(xù)3～5天，細胞數量增多后生長空間變小，細胞相互接觸可連接成片。

正常細胞：細胞相互接觸能抑制細胞運動，這種現象稱為接觸抑制（contact inhibition）。 

腫瘤細胞：沒有這種現象，可作為區(qū)別正常與腫瘤細胞的標志之一。當腫瘤細胞達到一定密度后向三維空間發(fā)展，使細胞發(fā)生堆積（piled up）。 

由于細胞不斷增殖分裂，細胞數量持續(xù)增多，培養(yǎng)液的營養(yǎng)成分減少，代謝產物增多，細胞受營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，則發(fā)生密度抑制（Density inhibition）,導致細胞分裂停止。 

3.停滯期（stagnate phase） 

細胞量和密度達到飽和，細胞停滯增殖。表明細胞進入到停滯期,細胞數量持平，也稱為平頂期（plateau）。 

特點：細胞不增殖,有代謝活動。培養(yǎng)液中的營養(yǎng)已逐漸耗盡,代謝產物積累增多,pH降低，此時需要傳代,否則細胞將會中毒,發(fā)生形態(tài)改變,細胞會從底物脫落死亡。 

注意：

細胞培養(yǎng)傳代過晚將影響下一代細胞的生長,至少要再傳 1～2代 ,通過換液淘汰死細胞和受損較輕的細胞。待細胞全部恢復后再用。
*標準品    1218-35-5     125mg    Xylometazoline Hydrochloride  
*標準品    1397-89-3    125mg        
*標準品    298-59-9     125mg        
鹽酸氟*庚酸酯標準品    3105-68-8     125mg        
*標準品    81403-68-1    150mg    Alfuzosin Hydrochloride    
*標準品        150mg    Amifostine    
甲磺酸溴隱亭標準品    22260-51-1    150mg    Bromocriptine Mesylate    
*標準品    1950/4/4    150mg    Cortisone Acetate    
敵敵畏標準品    62-73-7    150mg    Dichlorvos (AS)    
二羥苯宗標準品    131-53-3    150mg    Dioxybenzone    
恩他卡朋標準品    130929-57-6    150mg    Entacapone    
*標準品    57-63-6    150mg    Ethinyl Estradiol    
環(huán)丙羧酸標準品    86393-33-1     150mg    Fluoroquinolonic Acid  
細胞培養(yǎng)