血細胞分離實驗步驟

細胞凋亡檢測由紅細胞,白細胞,血小板等組成.實驗中常用白細胞來做研究,如炎癥滲出,細胞遷移,識別等都涉及到白細胞.白細胞又分為:粒細胞,淋巴細胞,單核細胞等.它們具有不同的功能.實驗中常需要分離血細胞方能進行。

這里主要論述人外周白細胞的分離，主要是中性粒細胞(Neutrophil)，淋巴細胞(Lymphocyte)，單核細胞(Monocyte)的分離。其它骨髓，脾淋巴細胞等分離可參，不同種屬間請注意分離液的選擇。

細胞分離中需要注意的幾個問題

1.如果您要做細胞培養，記住實驗中所用的試劑(分離液，洗滌液等)、器械等都要是無菌消毒的，并注意實驗中的無菌操作。

2. 離心轉速單位及時間：目前國外的文獻報道基本上用g為單位，注意g和轉速(rpm)的換算。

3.離心溫度：有的要求室溫，有的要求4攝氏度。實驗的操作要求盡可能熟練，連貫。

4.在用Ficoll分離單個核細胞(PBMC)時，通常含有少量的紅細胞，對于一般的實驗影響不大，如果實驗要求較高，可采取裂解液(有的需要無菌)，并注意裂解時間控制，以免影響單個核細胞的活性。

5. 在用Percoll配不連續梯度時(一般用高滲NaCl)，注意各成份體積的準確性，否則密度與預期的不一樣，影響分離效果。

6.用全血離心效果比全血稀釋后再離心效果差，稀釋一般等體積稀釋一倍。

7.分離液與樣本的體積比：一般應小于1：2(即一般為1體積分離液，2體積樣本，不宜超過2體積，小于2體積均可)

8.洗滌液的成分：不同文獻報道不一，有的使用PBS，有的為Hank’s，KRP等，可自己選定。主要是離子濃度及成份的不同，有的含有Mg2+,Ca2+。

9. 細胞凋亡檢測活性：0.2%臺盼藍染色3-5分鐘，鏡下觀察計數死亡細胞(藍染)
62749-46-6    *相關物質A標準品    Amrinone Related Compound A    100mg
62-73-7    敵敵畏標準品    Dichlorvos (AS)    150mg
62571-86-2    *標準品    Captopril    200mg
62-54-4    醋酸鈣標準品    Calcium Acetate (AS)    1g
625120-81-2     伊班膦酸相關物質A標準品        25mg
62-51-1     氯化乙酰甲*標準品    Methacholine Chloride (AS)    500mg
62498-67-3    西酞普蘭相關物質D標準品        15mg
624742-53-6     *相關物質D和F混合物標準品        20mg
62-44-2     *標準品    Phenacetin     500mg
62-44-2     非那西汀熔點標準標準品        500mg
62391-99-5     丙戊酸相關物質B標準品        50mg
細胞凋亡檢測