細胞凋亡檢測培養的條件

細胞凋亡檢測在體外培養中所需的條件與體內細胞基本相同。

1、無污染環境

培養環境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當細胞放置于體外培養時，與體內相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質積累等，可導致細胞死亡。因此在進行培養中，保持細胞生存環境無污染、代謝物及時清除等，是維持細胞生存的基本條件。

2、恒定的溫度

維持培養細胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養的標準溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞凋亡檢測代謝與溫度成正比;人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復;在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數有可能恢復;41-42℃1小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復可能;當溫度在43℃以上1小時，細胞全部死亡。

3、氣體環境

氣體是人體細胞培養生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環，產生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環境中。

二氧化碳既是細胞代謝產物，也是細胞生長繁殖所需成分，它在細胞培養中的主要作用在于維持培養基的PH值。大多數細胞的適宜PH為7.2-7.4，偏離這一范圍對細胞培養將產生有害的影響。但細胞耐酸性比耐堿性大一些，在偏酸環境中更利于細胞生長。有資料顯示，原代羊水細胞培養PH6.8時適。

細胞培養液PH濃度的調節常用的為加NaHCO3的方法，因為NaHCO3可供CO2，但二氧化碳易于逸出，故適用于封閉培養，而羥乙基乙硫磺酸(HEPES)因其對細胞無毒性，也起緩沖作用，有防止PH迅速變化的特性而用于開放細胞培養技術中，其大優點是在開放式培養或細胞觀察時能維持較恒定的PH值。

4、細胞培養基

培養是既是培養細胞中供給細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質，也是培養細胞生長和繁殖的生存環境。培養基的種類很多，按其物質狀態分為半固體培養基和液體培養基兩類;按其來源分為合成培養基和天然培養基。

(1)合成培養基：合成培養基是根據細胞所需物質的種類和數量嚴格配制而成的。內含碳水化合物、氨基酸、脂類、無機鹽、維生素、微量無素和細胞生長因子等。單獨使用細胞雖有生存但不能很好的生長增殖。

(2)天然培養基：使用普遍的天然培養基是血清，基本以小牛血清普遍。血清由于含有多種細胞生長因子、促粘附因子及其多種活性物質。與合成培養基合用，能使細胞凋亡檢測順利增殖生長。常見使用為5-20%。