生物反應(yīng)器在細(xì)胞凋亡檢測(cè)中的應(yīng)用

目前, 生物反應(yīng)器培養(yǎng)體系已成功應(yīng)用于某些細(xì)胞凋亡檢測(cè)群(如造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、多能干細(xì)胞等)的分離和培養(yǎng)。

1.造血干細(xì)胞(haematopoietic stem cell, HSC)

造血干細(xì)胞(HSC)是原始的造血細(xì)胞, 是體內(nèi)各種血細(xì)胞的*來(lái)源。1973年, Dexter等在體外成功分離培養(yǎng)出小鼠造血干/祖細(xì)胞。1980年, 人造血干細(xì)胞也被成功分離。之后HSC便成為干細(xì)胞領(lǐng)域的研究熱點(diǎn), 但自始至終卻一直不能突破分離得到的HSCs量少的難題。直至20世紀(jì)90年代, 攪動(dòng)懸浮培養(yǎng)(stirred suspension cultures)造血干細(xì)胞體系逐漸被提出, 在一定程度上提高了分離造血干細(xì)胞的效率。雖然分離HSCs的效率有所提高, 但是HSCs的體外擴(kuò)大培養(yǎng)仍不能很好地得到改善。之后, 隨著各種科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和研究者的不斷探索, 3D培養(yǎng)系統(tǒng)—灌注生物反應(yīng)器(perfusion reactors)逐漸發(fā)展起來(lái)。相比于傳統(tǒng)的靜態(tài)培養(yǎng), 灌注培養(yǎng)的HSC的擴(kuò)增率能提高10~20倍。近有人報(bào)道, HSC在攪動(dòng)或旋轉(zhuǎn)的生物反應(yīng)器(stirred or rotating wall vessels)中培養(yǎng)200 h后, 細(xì)胞數(shù)量增加高達(dá) 400倍, 且CD34+的造血干細(xì)胞量增加了30倍。

2.間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell, MSC)

間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)是典型的貼壁依賴型細(xì)胞, 以單層細(xì)胞生長(zhǎng)在培養(yǎng)皿中。但是, 2003年, Baksh 研究小組發(fā)現(xiàn), 在細(xì)胞因子的作用下, MSCs能以單細(xì)胞的形式在攪動(dòng)懸浮生物反應(yīng)器中生長(zhǎng)和擴(kuò)增, 通過(guò)RT-PCR和流式細(xì)胞檢測(cè), 發(fā)現(xiàn)MSCs仍然保持其干性特征和多系分化潛能。之后, 許多研究表明, 微載體更有助于MSCs的攪動(dòng)懸浮培養(yǎng)。Frauenschuh等利用微載體(Cytodex 1)懸浮培養(yǎng)豬 MSCs, 結(jié)果發(fā)現(xiàn),Cytodex 1能夠促進(jìn)MSCs的生長(zhǎng), 且能維持其向成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的分化潛能。隨后又相繼出現(xiàn)了大鼠骨髓MSCs、山羊MSCs、人胎盤(pán)MSCs等在微載體下利用生物反應(yīng)器進(jìn)行懸浮培養(yǎng)的報(bào)道。至此, *打破了MSCs只能進(jìn)行貼壁培養(yǎng)的觀點(diǎn)。近, 一種新的灌注系統(tǒng)(激流式灌注系統(tǒng))也被成功應(yīng)用于人MSCs的培養(yǎng), 并且MSCs能更好地保持向成骨細(xì)胞方向分化的多能分化潛能。這種灌注培養(yǎng)系統(tǒng)可實(shí)現(xiàn)激流系統(tǒng)和灌注系統(tǒng)的循環(huán), 灌注系統(tǒng)保證培養(yǎng)液供給, 提供細(xì)胞凋亡檢測(cè)正常生長(zhǎng)代謝所需的養(yǎng)分, 同時(shí)帶走代謝產(chǎn)物; 此外, 還利用激流式生物反應(yīng)器的拖帶式傳氣技術(shù)在線監(jiān)控溶氧、pH、溫度等培養(yǎng)條件, 隨時(shí)為細(xì)胞生長(zhǎng)創(chuàng)造培養(yǎng)環(huán)境, 同時(shí)此系統(tǒng)也可單獨(dú)進(jìn)行懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)。所以, 目前可以成功應(yīng)用生物反應(yīng)器進(jìn)行MSCs的培養(yǎng)和定向分化, 在組織工程中具有極大的實(shí)際應(yīng)用潛能。
硫化鋅    25克        *
硫化銅    25克    RT    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)
硫化鉛    100克        *
硫化鈉    25克        *
硫化鎘    10克    RT    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)
硫代乙酰胺    100克        進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)
硫代氧化型輔酶I    25克        *
硫代硫酸鉀    500克    RT    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)
硫代氨基脲    25克        *
磷脂酰乙醇胺    500克        *
細(xì)胞凋亡檢測(cè)