細胞凋亡檢測使用步驟及注意事項

細胞凋亡檢測使用步驟
1. 調整待測細胞的濃度為5×105-1×106個/ml。 2. 取1ml細胞，1000rpm，4℃離心10分鐘，棄上清。 3. 加入1ml預冷的PBS，輕輕震蕩使細胞懸浮，1000rpm，4℃離心10分鐘，棄上清（對于貼壁細胞，先用*消化，再用PBS洗滌）。 4. 重復步驟3兩次。 5. 將細胞重懸于200μl Binding Buffer。 6. 加入10μl Annexin V-FITC和10μl PI，輕輕混勻，避光室溫反應15分鐘 或4℃反應30 分鐘。 7. 加入300μl Binding Buffer，在1小時內用流式細胞儀檢測。 8. 若用熒光顯微鏡檢測，將細胞混合液離心，取細胞沉淀涂片，再進行觀察。
使用細胞凋亡檢測試劑盒的注意事項
為保證得到理想的實驗結果在使用此試劑盒之前請認真閱讀該注意事項。 
1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。 
2.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物質，在保存與操作時請注意避光。 
3.Propidium iodide（PI）能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用。 
4.在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留影響實驗結果。
 5.PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，上機前5分鐘再加入PI染色。 
6.整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作。 
7.反應完畢后請盡快檢測，因為細細胞凋亡檢測是一個動態的過程，反應1小時后熒光強度就開始衰變。 
8.成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響，如細胞類型、細胞膜上PS的密度、發生凋亡時PS翻轉的比例、誘導細胞凋亡的方法、所用試劑、誘導凋亡的時間等，把這些影響因素進行優化對實驗成功是非常必要的。
 L-乳酸脫氫酶    進口、國產    英文名稱:    Lactic dehydrogenase(rabbit muscle)    含量:    BR，5000u/g
骨膠原酶    進口、國產    英文名稱:    Collagenase    含量:    BR，2000-5000u/mg
*    進口、國產    英文名稱:    Hyaluronidase    含量:    高純，20000U/mg
辣根過氧化物酶    進口、國產    英文名稱:    POD    含量:    BR，2萬u/mg
α-D-半乳糖苷半乳糖水解酶    進口、國產    英文名稱:    α-Galactosidase preparation from green coffee beans    含量:    標準品，7萬u/mg
乳糖酶    進口、國產    英文名稱:    β-Galactosidase from Escherichia coli    含量:    BR，1200u/mg
L-*去氫酶    進口、國產    英文名稱:    L-GLDH    含量:    BR，45000u/mg
細胞凋亡檢測