Cas9穩(wěn)定表達的人肺癌細胞；A549-Cas9-538操作步驟 返回列表頁

Cas9穩(wěn)定表達的人肺癌細胞；A549-Cas9-538操作步驟操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量*，使*的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

細胞名稱   Cas9穩(wěn)定表達的人肺癌細胞；A549-Cas9-538操作步驟
形態(tài)特性 上皮樣；多角形

生長特性 貼壁生長

特征特性 該細胞是采用慢病毒感染的方式使A549細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術編輯基因組DNA。

培養(yǎng)條件 McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 10%FBS；400ug/ml G418

傳代方法 1:3~1：8傳代；每周2~3次。

傳代情況 C3

凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測 培養(yǎng)法（-）

STR Amelogenin：X,Y；CSF1PO：10,12；D12S391：18,19；D13S317：11,11；D16S539：11,12；D18S51：14,17；D19S433：29,29；D21S11：29,29；D2S1338：24,24；D3S1358：16,16；D5S818：11,11；D6S1043：11,13；D7S820：8,11；D8S1179：13,14；FGA：23,23；Penta E：7,11；TH01：8,9.3；TPOX：8,11；vWA：14,14；

同工酶

染色體

使用權限 A類

Cas9穩(wěn)定表達的人肺癌細胞；A549-Cas9-538操作步驟細胞培養(yǎng)
1、冷凍管應如何解凍？
取出冷凍管后， 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時， 必須注意安全， 預防冷凍管之爆裂。
2、細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時， 是否應馬上去除DMSO？
除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細胞外， 絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞）， 在解凍之后， 應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基， 細胞大都無法立即適應， 造成細胞無法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？
不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源， 所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產(chǎn)生*的影響。來自不同物種的血清， 在一些物質或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
肝動脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

TRIB2 Others Human 人 TRIB2 / TRB2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人惡性黑色素瘤細胞;A-375 [A375]

RBL-2H3細胞，白血病細胞 永生化鼻咽上皮細胞系,NP69-SV40T細胞 CL-0232TF-1(人血液白血病細胞)5×106cells/瓶×2

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-E2

TGFBI Others Human 人 BIGH3 / B
CXADR Others Mouse 小鼠 CXADR / CAR 人細胞裂解液 (陽性對照)

CL-0383MDA-MB-436(人癌細胞)5×106cells/瓶×2

人角膜上皮細胞總RNAHCEpiC tRNA

ZR75-1細胞，人癌細胞 129小鼠ES細胞,D3細胞 WM35, 人黑色素瘤細胞

MV3(人黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

HUAEC Pellet 人臍動脈內(nèi)皮細胞團塊 > 1 mio.cells 神經(jīng)細胞培養(yǎng)基NM-prf
CL-0383MDA-MB-436(人癌細胞)5×106cells/瓶×2

CXADR Others Mouse 小鼠 CXADR / CAR 人細胞裂解液 (陽性對照)

人角膜上皮細胞總RNAHCEpiC tRNA

ZR75-1細胞，人癌細胞 129小鼠ES細胞,D3細胞 WM35, 人黑色素瘤細胞

MV3(人黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

HUAEC Pellet 人臍動脈內(nèi)皮細胞團塊 > 1 mio.cells 神經(jīng)細胞培養(yǎng)基NM-prf
10× Taq Buffer With (NH4)2SO4  進口分裝  狗惡性組織細胞增生癥細胞

氧化銅粉(>99%,BR)  進口分裝  肝竇內(nèi)皮細胞

錳粉(>99%,BR)  進口分裝  成骨細胞

硫酸奎寧水合物(>98%,BR)  進口分裝  視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞
BrothAgarMedium  進口分裝  麥芽糖醇  Maltitol   號：  585-88-6  質量規(guī)格：  >98%

普通瓊脂斜面培養(yǎng)基(pH8.0-8.2)  進口分裝  L-酰胺  L-Phenylalaninamide  號：  5241-58-7  質量規(guī)格：  >99%,BR

Ordinaryagarslantmedium  進口分裝  L-蘇酸甲酯鹽酸鹽  L-Threonine methyl ester hydrochloride  號：  39994-75-7  質量規(guī)格：  0.98

酪胨瓊脂  進口分裝  N-乙酰-L-色酸乙酯  Ac-Trp-Oet  號：  2382-80-1  質量規(guī)格：  HPLC>98%,BR
Cas9穩(wěn)定表達的人肺癌細胞；A549-Cas9-538操作步驟*鹽瓊脂（新藥典）  進口分裝  DL-組酸鹽酸鹽  DL-Histidine•HCl  號：  123333-71-1  質量規(guī)格：  >98%,一水物，BR

察氏瓊脂  進口分裝  L-羥基脯酸  L-Hydroxyproline  號：  51-35-4  質量規(guī)格：  >99%,BR

SabouraudBHIAgar  進口分裝  醋酸組瑞林   Histrelin Acetate  號：  76712-82-8  質量規(guī)格：  BR,純度>98%

30%葡萄糖溶液(PH6.5±0.5)  進口分裝  *  Pranoprofen  號：  52549-17-4  質量規(guī)格：  >97%,BR

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