林業菌種實驗步驟及注意事項的資料

林業菌種實驗步驟及注意事項的資料
1. 把聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質電泳轉移到硝酸纖維膜上。

1)轉移緩沖液洗滌凝膠和硝酸纖維素膜，將硝酸纖維素膜鋪在凝膠上，用5ml移液管在凝膠上來回滾動去除所有的氣泡。

2)在凝膠/濾膜外再包一張3mm濾紙(預先用轉移緩沖液浸濕)，將凝膠夾在中間，保持濕潤和沒有氣泡。

3)將此濾紙/凝膠/薄膜濾紙按照廠家建議方法放入電泳裝置中，凝膠面向陰極。

4)將上述裝置放入緩沖液槽中，并灌滿轉移緩沖液以淹沒凝膠。

5)按照廠家所示接通電源開始電泳轉移。

6)轉移結束后，取出薄膜和凝膠，棄去凝膠。

2. 將薄膜漂在氨基黑中快速染色，直至分子量標準顯現時取出，記錄下標準位置。

3. 用100ml水洗滌纖維素膜，必要時可用脫色緩沖液。

4. 膜置印跡緩沖液中于37℃保溫1小時。

5. 室溫下，用PBS-Tween緩沖液洗滌薄膜。

6. 用封口機將薄膜封入塑料袋中，盡可能不留空氣。

7.袋的一角剪一緩沖液的小口，用透析袋夾緊。

8.混合：NGS(100微升)，印跡緩沖液中的抗體(10毫升)，加在裝薄膜的袋中，于室溫下搖動2小時(或4℃過夜)

9.用總體積300ml PBS-Tween緩沖液，分4次在一淺盤中洗滌薄膜，每次75ml。

10. 將連接*的羊抗兔IgG(40微升溶于10毫升印跡緩沖液/100微升 NGS)加在袋內，于室溫下搖動1小時。

11.按步驟9洗滌。

12.加入抗生素(antibiotic)蛋白-HRP(40微升溶于10毫升印跡緩沖液/100微升 NGS)，于室溫下搖動。
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